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人白介素1α(IL-1α)试ji盒

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大发888真人app名称: 人白介素1α(IL-1α)试ji盒
大发888真人app型号: IL-1α
大发888真人app展商: ELISA试ji盒
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人白介素1α(IL-1α)试ji盒  de详xi介绍


白介素1α(IL-1α)试ji盒

shi用说明书

白介素1α(IL-1α)试ji盒基本原理:

采用双大发888真人平tai夹心ELISA法。觤ei谷薎L-1α大发888真人平tai包被于酶biaoban上,实验时样pinhuobiao准pinzhongde人IL-1α与包被大发888真人平taijie合,you离de成分被洗去。襩ai渭尤肷锼鼗痙e抗人IL-1α大发888真人平tai和辣根guo氧化物酶biao记deqin和素。抗人IL-1α大发888真人平tai与jie簒ian诎淮蠓?88真人平tai上de人IL-1iang岷xi⑸锼赜雚in和素特异性jie合而形成**复合物,you离de成分被洗去。加入xian色底物(TMB),TMB在辣根guo氧化物酶de催化下呈现lan色,加终止液后变成黄色。用酶biao仪在450nmbo长chu测OD值,人IL-1α浓度与OD450值之间呈正比,通guo绘制biao准曲线计suan出样pinzhong人IL-1αde浓度。

白介素1α(IL-1α)试ji盒描述:

yingwen名称 Human IL-1α (Interleukin 1 Alpha) ELISA Kit
zhongwen名称 人白介素1α(IL-1α)酶lian**吸附测定试ji盒
货号 X-EL-H0088c zhongshu Human/人
规格 96T/Kit (8*12 strips) 48T/Kit (8*6 strips)
检测方法 双大发888真人平tai夹心法
检测范围 3.906~250pg/mL 灵min度 2.344pg/mL

试ji盒组成:

zhongwen名称

yingwen名称

规格

保存

  ELISA酶biaoban(可拆xie)

  Micro ELISA  Plate(Dismountable)

  8×12 / 8×6*

4/-20 #

冻干biao准pin

Reference Standard

  2/1 *

4/-20 #

biao准pin&样pinxi释液

Reference Standard & Sample Diluent

  1ping 20mL/12mL*

4

浓缩生物素化大发888真人平tai

Concentrated Biotinylated Detection Ab

  1 120μL/70μL*

4/-20 #

生物素化大发888真人平taixi释液

Biotinytated Detection Ab Diluent

  1ping 10mL/6mL*

4

浓缩HRP酶jie合物

Concentrated HRP Conjugate

  1 120μL/70μL*

4(bi光)

酶jie合物xi释液

HRP Conjugate Diluent

  1ping 10mL/6mL*

4

浓缩洗祔ou海?/span>25×

ConcentratedWashBuffer (25×)

  1ping 30mL/16mL*

4

底物溶液(TMB

Substrate Reagent

  1ping 10mL/6mL*

4(bi光)

穋ongχ罩挂裹/span>

Stop Solution

  1ping 10mL/6mL*

4

封ban竎ai|/span>

Plate Sealer

  5/3 *

 

大发888真人app说明书

Product  Description

  1 

 

质检baogao

Certificate of Analysis

  1 

 

特别说明
*: [96T/48T](打开包装后请及时检cha所有物pin是否齐全完整)
#: yi周内shi觤ei纱嬗冱/span>4℃,需长时间存fanghuo多次shi用建议存于-20.                                      

白介素1α(IL-1α)试ji盒检测前准备工作:

1. 请提前20穤hong觕ongbing箱zhong取出试ji盒,平heng至室温。

2. 将浓缩洗祔ou河盟珃heng水xi释(1:25)。蝐ong猛阣efang回4℃。congbing箱zhong取出de浓缩洗祔ou嚎赡苡衘ie晶,shu于正常现象,可用40℃水浴微加热shijie晶完全溶解后再配制洗祔ou海尤任露萣u要超guo50℃,shi用时洗祔ou河ξ椅拢5眗ishi用。

3. biao准pin10000×g离心1穤hong樱尤隻iao准pin&样pinxi释液1.0mL至冻干biao准pinzhong,旋紧管gai,静置10穤hong樱舷碌叩故危琩aiqi充分溶解后,用yi液器将qi轻轻hun匀(浓度为8000pg/mL)。然后根ju需要进行倍比xi蕋ingㄗⅲ篵u要直接在穋ong讂hong进行倍比xi蕋ing=ㄒ榕渲瞥梢韵屡ǘ龋喊凑誼i释方法tu例 biao准pin&样pinxi释液直接作为空白孔0ng/mL。如配制5ng/mLbiao准pin:取0.5mL10ng/mLde上述biao准pin加入含有0.5mLbiao准pin&样pinxi释液deEP管zhong,hun匀即可,qiyu浓度襩aisi嗤啤Ⅻ/span> 

4. 生物素化大发888真人平tai工作液:实验前计suan当次实验所需用量(以100μL/孔计),实际配制时应多配制100-200μL。shi用前15穤hong樱陨锼鼗蠓?88真人平taixi释液xi释浓缩生物素化大发888真人平tai(1:100)成工作浓度。当rishi用。

5. 酶jie合物工作液:实验前计suan当次实验所需用量(以100μL/孔计),实际配制时应多配制100-200μL。shi用前15穤hong樱悦竕ie合物xi释液xi释浓缩HRP酶jie合物(1:100)成工作浓度。

当rishi用。

白介素1α(IL-1α)试ji盒biao准pinxi释方法tu例:(以500μL/管为例,ye可根ju实际用量laixi蕋ing纥/span>200μL/管)

            

1. 在各孔zhong加入biao准pinhuo样pin各100μL 37℃孵育90穤hong尹/span>

2. 加入100μ生物素化大发888真人平tai工作液,37℃孵育60穤hong尹/span>

3. 洗涤3

4. 加入100μL酶jie合物工作液, 37℃孵育30穤hong尹/span>

5. 洗涤5

6. 加入90μL底物溶液, 37℃孵育15穤hong觶uoyou

7. 加入50μL终止液,立即在450nmbo长chu测量OD

8. jie果计suan

yi、操作因素对ELISAjie果de影响ELISA操作步骤复杂,操作bu当将yinqi较大dewucha。以下叙述各ge步骤zhongde影响因素。

1.加样

2.温育

3.洗涤

4.xian色

5.比色

二、hui区deshe置通常情况下,ELISA定性实验以“阳性”和“阴性”laibaogaojie果,liang者间有yi条分界线被称为“阳性舩ie现怠保?/span>cut-off valueCO值),这是定性**测定jie果baogaode依ju。

三、biao本复chaELISA手工检测guo程复杂,影响因素较多,即shi室内质控在控,ye可能因孔间cha异而造成jie果decha异,因此加大复cha力度是保证jie果准que性de可靠方法,比如对HBsAgHBeAgHCV-AbHIV-AbTP-Ab等项目de可疑、弱阳性biao本及少见模式de检测jie果进行复cha。

四、jie果舩ie虾蚥aogao常用下lie几zhong方法表示jie果:

1.定性测定

2.半定量测定 jie果yi般以滴度表示。

3.定量测定 糲ong靡褄hi量debiao准pin作yi系liexi释后进行ELISA测定,绘制biao准曲线,jie果以you羓i縣uo单位表示。在ELISA定量检测zhongmeiyi块穋ongan都必须绘制相应debiao准曲线。

注yi事项:

仔xi阅读说明书。

检cha试ji盒biao签上de有效qi。如果超guo有效qi,请勿shi用。

按说明书que定所有试ji齐全(数量、tiji)。

biao本制备要规范,mei份biao本tiji要按2-3ge复孔以上de量制备(贮存),尽量穤hong皕uo备份。短qi内无法实验者,注yidi温保存。

准备好所有实验额外所需物pin,(比如yi液器,试管,qing洗器,酶biao仪)。

按说明书将所用试ji平heng至室温,根ju检测biao本数量que定所需试jide量。

检cha试ji盒内meizhong试jide贮存条件,保证所有试ji均按照试ji盒内说明书推荐de条件存储。

检chabuwen定huo者变质de试ji溶液(比如沉dianhuo变色)。有些试ji,比如biao准pinxi释液huo者检测xi释液,可能在she计时就含有沉dian物。所有试ji在祑en朊竍iaoban之前,必需充分hun匀。而由于沉dian物de特性,在加入酶biaoban之前,必需buting搅拌。

保证充分de孵育时间和温度。

切勿shi用butong生产批号de试ji取代现有试jihuohun合现有试ji。

在hun合huo溶解蛋白溶液时,bimian泡沫产生。

在实验开始之前,安排好实验流程。

在实验开始之前,qing洁工作tai。

若有问题,应与我公司huo代理商deji术支持lian系

白介素1α(IL-1α)试ji盒jie果舩ie吸/span>:

1. meigebiao准pindeOD值减去空白孔deOD值后作tu,如she置复孔,则应取qi平均值计suan。以biao准pinde浓度为横坐biao,OD值为纵坐biao,绘出biao准曲线。yi可以OD值为横坐biao,biao准pinde浓度为纵坐biao,绘出biao准曲线。

2. 推荐shi用专业de曲线制作软件,如curve expert 1.3huo1.4,在软件界面既可根ju样pinOD值,由biao准曲线cha出相应de浓度,乘以xi释倍数;yi可将样pindeOD值代入biao准曲线de拟合方程式,计suan出样pin浓度,再乘以xi释倍数,即为样pinde实际浓度。

3. 若样pinOD值高于biao准曲线上限,应适当xi释后重测,计suan浓度时应乘以xi释倍数。 

白介素1α(IL-1α)试ji盒有效qiwen定性考察

本试验以白介素1α(IL-1α)为例

1.  OD值:

正常保存条件下有效qi内和超guo有效qi2ge月所测OD值比较

正常有效qi内OD值: 3.2512.8452.126, 1.859, 1.463, 1.022, 0.710, 0.08

超guo2ge月有效qiOD值:3.1.7, 2.643, 2.125, 1.796, 1.453, 0.876, 0.432, 0.07

2.回收lv:分别于定值血qing及血浆zhong加入yi定量de白介素1α(IL-1α)biao准pin,重复测定并计suanqipin均值,回收lv为测定值与理论值de比lv。

        正常保存条件下有效qi内和guo有效qi2ge月elisa 试ji盒回收lv检测jie果

Sample

Conditions

Recovery range(%)

Average(%)

Serum(n=6)

normal

88-106

95

After 12 month

80-100

87

EDTA plasma(n=6)

normal

88-106

97

After 12 month

78-98

87

3. 线性:分别于定值血qing及血浆zhong加入yi定量de白介素1α(IL-1α)biao准pin,并将biao本按1:2,1:4,1:8xi蕋ing咝苑段Ъ次獂i释后样本zhong白介素1α(IL-1α)含量de测定值与理论值de比lv。

         正常保存条件下有效qi内和guo有效qi2ge月elisa 试ji盒回线性检测jie果

Sample

Conditions

1:2

1:4

1:8

Serum(n=6)

normal

81-92%

85-90%

89-105%

After 12month

80-88%

82-87%

87-101%

EDTA plasma(n=6)

normal

93-104%

81-97%

91-96%

After 12month

82-95%

75-82%

74-90%

4.  精密度:以样pin测定值de变异系数CV表示。CV%=SD/meanx100

批内cha:取tongyi批次试ji簒ie詃i值,zhong值和高值样本进衳ie考觳猓琺ei份样本测定20次,分别计suanbutong浓度样本de平均值和SD值。

批间cha:选取 3 gebutong批次de试ji盒分别对di、謝iao⒏咧刀ㄖ笛窘xie坎舛ǎ meige样本shi用tongyi试ji盒重复测定 8 次,分别计suanbutong浓度样本de平均值及 SD 值。(批内cha: CV<10%;批间cha: CV<11%)

       正常保存条件下有效qi内和guo有效qi2ge月elisa 试ji盒回精密度检测jie果

                    Intra-assay precision

Conditions

normal

After 12month

normal

After 12month

normal

After 12month

sample

1

1

2

2

3

3

n

20

20

20

20

20

20

Mean(ng/ml)

16.68

14.22

70.25

62.36

369.75

327.88

SD

1.08

1.25

4.21

5.31

24.69

32.87

CV(%)

6.5

8.8

6.0

8.5

6.6

10

  

Conditions

normal

After 12month

normal

After 12month

normal

After 12month

Sample

1

1

2

2

3

3

n

20

20

20

20

20

20

Mean(ng/ml)

18.72

13.68

65.98

61.25

387.22

425.26

SD

1.45

1.52

4.83

5.18

28.49

36.87

CV%

7.7

11.1

7.3

8.5

7.3

8.7

白介素1α(IL-1α)试ji盒会出现de问题及解jue办法:

1. 加入穋ongχ罩挂汉螅琺ei有吸光值huo吸光值偏di。

a.原因:未加入酶biao记物。

解jue办法:请按照操作步骤进衳iaoⅫ/span>

b.原因:试ji盒内容物未能充分回。

解jue办法:que定试ji盒内容物回温后再进行操作。

c.原因:室温taidi。

解jue办法:若室温taidi(<19),请于操作步骤4,适当yan长温育时间。

d.原因:未shi用试ji盒deqing洗液qing洗。

解jue办法: 请用试ji盒内所提供deqing洗液qing洗。

e.原因:试ji盒已guo有效qi限。

解jue办法:请更换成仍在有效qi限内de试ji簒iaoⅫ/span>

2. biao准曲线线性bu佳,huo是平行性bu好。

a.原因:温育位置bi光bu好huo受到气流干扰。

解jue办法: 请que认温育位置既bu透光yebu透feng(如chou屉内)

b.原因:操作时间拖taijiu。

解jue办法:请在方法熟练后再进行操作。

c.原因:微孔间相互污染。

解jue办法: 加样pin时,请xiao心勿溅出微孔外,以mian造成qi它微孔de污染。

d.原因:biao准pinhuo酶biao记物所加入de量buyi致。

解jue办法:请shi用已校正guodeyi液qiang,并que保qi与吸头之间有高度密合性。

e.原因:添加样pinhuo试jide操作方法bu正que。

解jue办法:加样pinhuo试ji时,吸头请勿接触微孔。

f.原因:洗banguo程发生问题(如管ludusai、洗完ban后未立刻进行下yi步骤)

解jue办法:请sui时监控洗ban机洗banguo程,洗完后立即进行下yi步骤。

3. 吸光值均偏高(huo线性bu够dou)

a.原因:室温tai高(>25)

解jue办法: 若无法降di室内温度,请适当缩短步骤4de温育时间。

b.原因:底物溶液受到污染。

解jue办法: 若发现底物溶液已呈现淡lan色,请bu要再shi用。

c.原因:穋ongκ奔涑琯uotaijiu。

解jue办法:请控謕incongκ奔洹Ⅻ/span>

d.原因:酶biao记物污染了盒内qi它试ji。

解jue办法:shi用guode吸头应立即丢弃,可bimian试ji间相互污染,fan是试ji(特别蕅iao竍iao记物与底物溶液)接触guode容器应立即qing洗干净。(先以漂白水浸泡,再以qing水冲洗干净,可que保无残留)

4. 阴性biao准pinde吸光值di于阳性biao准pinde吸光值。

a.原因:微孔zhongde试ji未能充分hun簒iⅫ/span>

解jue办法: 试ji加完后,需轻qiao盘四周shiqi充分hun合均匀。

b.原因:洗banguo程发生问题(tong2-f.)

解jue办法:请参考2-f.

c.原因:添加样pinhuo酶biao记物de量buyi致。

解jue办法: 请参考2-d.