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人白介素1受体拮抗ji(IL-1ra/IL-1F3)shijihe

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大发888真人app型号: IL-1ra/IL-1F3
大发888真人app展商: ELISAshijihe
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人白介素1受体拮抗ji(IL-1ra/IL-1F3)shijihe  的详细介绍


白介素1受体拮抗ji(IL-1ra/IL-1F3)shijihe

使用说明书

白介素1受体拮抗ji(IL-1ra/IL-1F3)shijiheji本原理:

cai用shuang大发888真人平台夹心ELISA法。用抗人IL-1ra大发888真人平台包被于酶标板shang,实yan时yangpin或标譲i分械娜薎L-1rayu包被大发888真人平台结合,游离的cheng分被洗去。依次jia入生物素化的抗人IL-1ra大发888真人平台和纀ei趸锩副昙堑那缀退亍?谷薎L-1ra大发888真人平台yu结簒ian诎淮蠓?88真人平台蓌i娜薎L-1ra结簒i⑸锼貀u亲和素特异性结合而形cheng**fu合物,游离的cheng分被洗去。jia入xian色底物(TMB),TMB在纀ei趸锩傅拇呋鲁蕏ian蓝色,jia终止液后变cheng黄色。用酶标仪在450nm波长处测OD值,人IL-1ranong度yuOD450值zhijian呈正比,通过绘制标准曲线ji算chuyangpin中人IL-1ra的nong秖uⅫ/span>

白介素1受体拮抗ji(IL-1ra/IL-1F3)shijihemiao述:

英文名chen Human IL-1ra/IF-1F3 (Interleukin 1 Receptor Antagonist) ELISA Kit
中文名chen 人白介素1受体拮抗ji(IL-1ra/IL-1F3)酶联**吸附测定shijihe
货号 X-EL-H0089c 种属 Human/人
规格 96T/Kit (8*12 strips) 48T/Kit (8*6 strips)
检测方法 shuang大发888真人平台夹心法
检测fan围 31.25~2000pg/mL ling敏度 18.75pg/mL

shijihe组cheng:

中文名chen

英文名chen

规格

保cun

  ELISA酶标板(可拆卸)

  Micro ELISA  Plate(Dismountable)

  8×12 / 8×6*

4/-20 #

dong干标譲i饵/span>

Reference Standard

  2/1 *

4/-20 #

标譲i饵/span>&yangpinxishi液

Reference Standard & Sample Diluent

  1 20mL/12mL*

4

nong缩生物素化大发888真人平台

Concentrated Biotinylated Detection Ab

  1 120μL/70μL*

4/-20 #

生物素化大发888真人平台xishi液

Biotinytated Detection Ab Diluent

  1 10mL/6mL*

4

nong缩HRP酶结合物

Concentrated HRP Conjugate

  1 120μL/70μL*

4(避光)

酶结合物xishi液

HRP Conjugate Diluent

  1 10mL/6mL*

4

nong缩洗涤襤ai?/span>25×

ConcentratedWashBuffer (25×)

  1 30mL/16mL*

4

底物溶襤ai?/span>TMB

Substrate Reagent

  1 10mL/6mL*

4(避光)

反应终止液

Stop Solution

  1 10mL/6mL*

4

封板fumo

Plate Sealer

  5/3 zhang*

 

大发888真人app说明书

Product  Description

  1 fen

 

质检报告

Certificate of Analysis

  1 fen

 

特别说明
*: [96T/48T](打开包装后请及时检查所有物pin是否齐全完整)
#: 一周内使用可cun于4℃,需长时jiancun放或duo次使用建议cun于-20.                                      

白介素1受体拮抗ji(IL-1ra/IL-1F3)shijihe检测前准bei工作:

1. 请提前20分钟从冰箱中quchushijihe,平衡至室温。

2. 将nong缩洗涤液用shuang蒸shuixishi(1:25)。未用完的放回4℃。从冰箱中quchu的nong缩洗涤液可能有结jing,属于正常xian象,可用40℃shui浴微jiare使结jing完全溶解后zai配制洗涤襤ai╦iare温度不要超过50℃,使用时洗涤液应为室温)。当ri使用。

3. 标譲i饵/span>10000×g离心1分钟,jia入标譲i饵/span>&yangpinxishi液1.0mL至dong干标譲i分校艄芨牵仓曼/span>10分钟,shang下颠倒shu次,待其充分溶解后,用移液器将其轻轻混匀(nong度为8000pg/mL)。然后根据需要进行倍眗enhi(注:不要直jie在反应孔中进行倍眗enhi)。建议配制cheng以下nong度:按照xishi方法图例 标譲i饵/span>&yangpinxishi液直jie作为kong白孔0ng/mL。如配制5ng/mL标譲i罚簈u0.5mL10ng/mL的shang述标譲i穓ia入含有0.5mL标譲i饵/span>&yangpinxishi液的EP管中,混匀即可,其余nong度依此类推。 

4. 生物素化大发888真人平台工作襤ai菏祔an前ji算当次实yan所需用量(以100μL/孔ji),实际配制时应duo配制100-200μL。使用前15分钟,以生物素化大发888真人平台xishi液xishinong缩生物素化大发888真人平台(1:100)cheng工作nong秖u5眗i使用。

5. 酶结合物工作襤ai菏祔an前ji算当次实yan所需用量(以100μL/孔ji),实际配制时应duo配制100-200μL。使用前15分钟,以酶结合物xishi液xishinong缩HRP酶结合物(1:100)cheng工作nong秖uⅫ/span>

当ri使用。

白介素1受体拮抗ji(IL-1ra/IL-1F3)shijihe标譲i穢ishi方法图例aiㄒ狱/span>500μL/管为例,也可根据实际用量来xishi,如200μL/管)

            

1. 在各孔中jia入标譲i坊騳angpin各100μL 37℃孵yu90分钟

2. jia入100μ生物素化大发888真人平台工作襤ai?/span>37℃孵yu60分钟

3. 洗涤3

4. jia入100μL酶结合物工作襤ai?/span> 37℃孵yu30分钟

5. 洗涤5

6. jia入90μL底物溶襤ai?/span> 37℃孵yu15分钟左右

7. jia入50μL终止襤ai⒓丛冱/span>450nm波长处测量OD

8. 结果ji算

一、操作yin素对ELISA结果的影xiangELISA操作步zhoufu杂,操作不当将引起jiao大的误差。以下叙述各个步zhou中的影xiangyin素。

1.jiayang

2.温yu

3.洗涤

4.xian色

5.比色

二、灰区的she置通常情况下,ELISA定性实yan以“阳性”和“yin性”来报告结果,liang者jian有一条分jie线被chen为“阳性判秞ian怠保?/span>cut-off valueCO值),这是定性**测定结果报告的依据。

san、标本fu查ELISA手工检测过程fu杂,影xiangyin素jiaoduo,即使室内质kong在kong,也可能yin孔jian差异而造cheng结果的差异,yin此jia大fu查li度是保zheng结果准确性的可kao方法,眗e缍狱/span>HBsAgHBeAgHCV-AbHIV-AbTP-Abdeng项目的可疑、弱阳性标本及少见moshi的检测结果进行fu查。

四、结果判断和报告常用下列几謟hi椒ū硎窘峁裹/span>

1.定性测定

2.ban定量测定 结果襤ua阋缘味缺硎尽Ⅻ/span>

3.定量测定 即用已zhi量的标譲i纷饕粁i列xishi后进行ELISA测定,绘制标准曲线,结果以you羓i炕虻ノ槐硎尽T冱/span>ELISA定羕ao觳庵忻恳豢榉从Π錮ubixu绘制xiang应的标准曲线。

注意事项:

仔细阅读说明书。

检查shijihe标签蓌i挠衳iao期。如果超过有xiao期,请勿使用。

按说明书萬anㄋ衧hiji齐全(shu量、体积)。

标本制bei要规fan,每fen标本体积要按2-3个fu孔以蓌i牧恐芺ei(zhucun),尽量分装做beifen。短期内无法实yan者,注意低温保cun。

准bei好所有实yane外所需物pin,(眗e缫埔浩鳎瑂hi管,清洗器,酶标仪)。

按说明书将所用shiji平衡至室温,根据检测标本shu量萬anㄋ鑣hiji的量。

检查shijihe内每种shiji的zhucun条件,保zheng所有shiji均按照shijihe内说明书推荐的条件cun储。

检查不稳定或者变质的shiji溶襤aiūre绯恋砘虮渖S行﹕hiji,眗e绫曜ji穢ishi液或者检测xishi襤ai赡茉趕heji时就含有沉淀物。所有shiji在滴入酶标板zhi前,bi需充分混詑u6捎诔恋砦锏奶匦裕趈ia入酶标板zhi前,bi需不停搅拌。

保zheng充分的孵yu时jian和温秖uⅫ/span>

切勿使用不tong生产批号的shijiqu代xian有shiji或混合xian有shiji。

在混合或溶解蛋白溶液时,避免泡沫产生。

在实yan开始zhi前,安pai好实yanliu程。

在实yan开始zhi前,清洁工作台。

ruo有问题,应yu我公薺ing虼砩痰膉i术支持联xi

白介素1受体拮抗ji(IL-1ra/IL-1F3)shijihe结果判断:

1. 每个标譲i返命/span>OD值减去kong白孔的OD值后作图,如she置fu孔,则应qu其平均值ji算。以标譲i返膎ong度为横坐标,OD值为纵坐标,绘chu标准曲线。亦可以OD值为横坐标,标譲i返膎ong度为纵坐标,绘chu标准曲线。

2. 推荐使用专ye的曲线制作软件,如curve expert 1.31.4,在软件jie面既可根据yangpinOD值,由标准曲线查chuxiang应的nong度,cheng以xishi倍shu;亦可将yangpin的OD值代入标准曲线的拟合方程shi,ji算chuyangpinnong度,zaicheng以xishi倍shu,即为yangpin的实际nong秖uⅫ/span>

3. ruoyangpinOD值gao于标准曲线shang限,应适当xishi后重测,ji算nong度时应cheng以xishi倍shu。 

白介素1受体拮抗ji(IL-1ra/IL-1F3)shijihe有xiao期稳定性kao察

本shiyan以白介素1受体拮抗ji(IL-1ra/IL-1F3)为例

1.  OD值:

正常保cun条件下有xiao期内和超过有xiao期2个月所测OD值比jiao

正常有xiao期内OD值: 3.2512.8452.126, 1.859, 1.463, 1.022, 0.710, 0.08

超过2个月有xiao期OD值:3.1.7, 2.643, 2.125, 1.796, 1.453, 0.876, 0.432, 0.07

2.回收率:分别于定值血清及血浆中jia入一定量的白介素1受体拮抗ji(IL-1ra/IL-1F3)标譲i罚豧u测定并ji算其pin均值,回收率为测定值yu理论值的比率。

        正常保cun条件下有xiao期内和过有xiao期2个月elisa shijihe回收率检测结果

Sample

Conditions

Recovery range(%)

Average(%)

Serum(n=6)

normal

88-106

95

After 12 month

80-100

87

EDTA plasma(n=6)

normal

88-106

97

After 12 month

78-98

87

3. 线性:分别于定值血清及血浆中jia入一定量的白介素1受体拮抗ji(IL-1ra/IL-1F3)标譲i罚⒔瓯景滁span>1:2,1:4,1:8xishi,线性fan围即为xishi后yang本中白介素1受体拮抗ji(IL-1ra/IL-1F3)含量的测定值yu理论值的比率。

         正常保cun条件下有xiao期内和过有xiao期2个月elisa shijihe回线性检测结果

Sample

Conditions

1:2

1:4

1:8

Serum(n=6)

normal

81-92%

85-90%

89-105%

After 12month

80-88%

82-87%

87-101%

EDTA plasma(n=6)

normal

93-104%

81-97%

91-96%

After 12month

82-95%

75-82%

74-90%

4.  精密度:以yangpin测定值的变异xishuCV表示。CV%=SD/meanx100

批内差:qutong一批次shijihe对低值,中值和gao值yang本进行定羕ao觳猓縡enyang本测定20次,分别ji算不tongnong度yang本的平均值和SD值。

批jian差:选qu 3 个不tong批次的shijihe分别对低、中、gao值定值yang本进行定量测定, 每个yang本使用tong一shijihe重fu测定 8 次,分别ji算不tongnong度yang本的平均值及 SD 值。(批内差: CV<10%;批jian差: CV<11%)

       正常保cun条件下有xiao期内和过有xiao期2个月elisa shijihe回精密度检测结果

                    Intra-assay precision

Conditions

normal

After 12month

normal

After 12month

normal

After 12month

sample

1

1

2

2

3

3

n

20

20

20

20

20

20

Mean(ng/ml)

16.68

14.22

70.25

62.36

369.75

327.88

SD

1.08

1.25

4.21

5.31

24.69

32.87

CV(%)

6.5

8.8

6.0

8.5

6.6

10

  

Conditions

normal

After 12month

normal

After 12month

normal

After 12month

Sample

1

1

2

2

3

3

n

20

20

20

20

20

20

Mean(ng/ml)

18.72

13.68

65.98

61.25

387.22

425.26

SD

1.45

1.52

4.83

5.18

28.49

36.87

CV%

7.7

11.1

7.3

8.5

7.3

8.7

白介素1受体拮抗ji(IL-1ra/IL-1F3)shijihe会chuxian的问题及解jueban法:

1. jia入反应终止液后,没有吸光值或吸光值偏低。

a.原yin:未jia入酶标记物。

解jueban法:请按照操作步zhou进行。

b.原yin:shijihe内容物未能充分回。

解jueban法:萬an╯hijihe内容物回温后zai进行操作。

c.原yin:室温太低。

解jueban法:ruo室温太低(<19),请于操作步zhou4,适当延长温yu时jian。

d.原yin:未使用shijihe的清洗液清洗。

解jueban法: 请用shijihe内所提供的清洗液清洗。

e.原yin:shijihe已过有xiao期限。

解jueban法:请更换cheng仍在有xiao期限内的shijihe。

2. 标准曲线线性不jia,或是平行性不好。

a.原yin:温yu位置避光不好或受到qiliu干扰。

解jueban法: 请确ren温yu位置既不tou光也不tou风(如chou屉内)

b.原yin:操作时jiantuo太久。

解jueban法:请在方法熟lian后zai进行操作。

c.原yin:微孔jianxiang互污染。

解jueban法: jiayangpin时,请小心勿溅chu微孔外,以免造cheng其它微孔的污染。

d.原yin:标譲i坊蛎副昙俏锼鵭ia入的量不一致。

解jueban法:请使用已校正过的移液枪,并确保其yu吸头zhijian有gao度密合性。

e.原yin:添jiayangpin或shiji的操作方法不正确。

解jueban法:jiayangpin或shiji时,吸头请勿jiechu微孔。

f.原yin:洗板过程发生问题(如管耭an氯⑾赐臧搴笪戳⒖探邢乱徊絲hou)

解jueban法:请随时jiankong洗板机洗板过程,洗完后立即进行下一步zhou。

3. 吸光值均偏gao(或线性不够陡)

a.原yin:室温太gao(>25)

解jueban法: ruo无法jiang低室内温度,请适当缩短步zhou4的温yu时jian。

b.原yin:底物溶液受到污染。

解jueban法: ruo发xian底物溶液已呈xian淡蓝色,请不要zai使用。

c.原yin:反应时jian超过太久。

解jueban法:请kong謕in从κ眏ian。

d.原yin:酶标记物污染了he内其它shiji。

解jueban法:使用过的吸头应立即丢弃,可避免shijijianxiang互污染,凡是shiji(特别是酶标记物yu底物溶液)jiechu过的容器应立即清洗干jing。(xian以piao白shui浸泡,zai以清shui冲洗干jing,可确保无残liu)

4. yin性标譲i返奈庵档陀谘粜员曜ji返奈庵怠Ⅻ/span>

a.原yin:微孔中的shiji未能充分混簒iⅫ/span>

解jueban法: shijijia完后,需轻敲盘四周使其充分混合均詑uⅫ/span>

b.原yin:洗板过程发生问题(tong2-f.)

解jueban法:请参kao2-f.

c.原yin:添jiayangpin或酶标记物的量不一致。

解jueban法: 请参kao2-d.

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