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人谷丙转氨酶(ALT)shi剂he价ge

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大发888zhen人app名称: 人谷丙转氨酶(ALT)shi剂he价ge
大发888zhen人app型号: ALT
大发888zhen人app展shang: ELISAshi剂he
大发888zhen人app文dang: wu相关文dang

jian单介绍

人谷丙转氨酶(ALT)shi剂he价ge采用双大发888zhen人ping台夹xinELISA法。用抗人ALT大发888zhen人ping台包被于酶标板上,实验shi样品或标准品中的人ALT与包被大发888zhen人ping台结合,游离的成穤hi幌磓u。依ci加入生物su化祄u谷薃LT大发888zhen人ping台和纀ei齳ang化物酶标记的亲和su。抗人ALT大发888zhen人ping台与结合在包被大发888zhen人ping台蓌i娜薃LT结合、生物su与亲和su特yi性结合er形成**复合物,游离的成穤hi幌磓u。加入显色底物(TMB),TMB在纀ei齳ang化物酶的催化下呈xian蓝色,加终zhi液后变成黄色。用酶标仪在450nm波长处ceODzhi,人谷丙转氨酶(ALT)shi剂he浓度与OD450zhi之间硈hou齜i,通过绘制标准曲xian计算出样品中人ALT的浓度。


人谷丙转氨酶(ALT)shi剂he价ge  的详蟜u樯埸/font>


人谷丙转氨酶(ALT)shi剂he价ge

使用说明书

谷丙转氨酶(ALT)shi剂he基本原理:

采用双大发888zhen人ping台夹xinELISA法。用抗人ALT大发888zhen人ping台包被于酶标板上,实验shi样品或标准品中的人ALT与包被大发888zhen人ping台结合,游离的成穤hi幌磓u。依ci加入生物su化祄u谷薃LT大发888zhen人ping台和纀ei齳ang化物酶标记的亲和su。抗人ALT大发888zhen人ping台与结合在包被大发888zhen人ping台蓌i娜薃LT结合、生物su与亲和su特yi性结合er形成**复合物,游离的成穤hi幌磓u。加入显色底物(TMB),TMB在纀ei齳ang化物酶的催化下呈xian蓝色,加终zhi液后变成黄色。用酶标仪在450nm波长处ceODzhi,人ALT浓度与OD450zhi之间硈hou齜i,通过绘制标准曲xian计算出样品中人ALT的浓度。

谷丙转氨酶(ALT)shi剂hemiao述:

英文名称 Human ALT (Alanine Transaminase) ELISA Kit
中文名称 人谷丙转氨酶(ALT)酶联**吸fuce定shi剂he
货号 X-EL-H0312c 謟hi簏/span> Human/人
规ge 96T/Kit (8*12 strips) 48T/Kit (8*6 strips)
检ce方法 双大发888zhen人ping台夹xin法
检ce范围 0.313~20ng/mL 灵敏度 0.188ng/mL

人谷丙转氨酶(ALT)shi剂he价ge组成:

中文名称

英文名称

规ge

保存

  ELISA酶标板(可拆卸)

  Micro ELISA  Plate(Dismountable)

  8×12 / 8×6*

4/-20 #

冻干标准品

Reference Standard

  2/1 *

4/-20 #

标准品&样品稀释液

Reference Standard & Sample Diluent

  1 20mL/12mL*

4

浓缩生物su化大发888zhen人ping台

Concentrated Biotinylated Detection Ab

  1 120μL/70μL*

4/-20 #

生物su化大发888zhen人ping台稀释液

Biotinytated Detection Ab Diluent

  1 10mL/6mL*

4

浓缩HRP胒u岷衔铧/span>

Concentrated HRP Conjugate

  1 120μL/70μL*

4(避光)

胒u岷衔锵∈鸵裹/span>

HRP Conjugate Diluent

  1 10mL/6mL*

4

浓缩洗涤液(25×

ConcentratedWashBuffer (25×)

  1 30mL/16mL*

4

底物溶液(TMB

Substrate Reagent

  1 10mL/6mL*

4(避光)

反应终zhi液

Stop Solution

  1 10mL/6mL*

4

封板覆膜

Plate Sealer

  5/3 *

 

大发888zhen人app说明书

Product  Description

  1 

 

zhi检报告

Certificate of Analysis

  1 

 

特bie说明
*: [96T/48T](打kai包装后请及shi检查所you物品是否qi全完整)
#: yi周内使用可存于4℃,需长shi间存放或duoci使用建议存于-20.                                      

谷丙转氨酶(ALT)shi剂he检ce前准beigong作:

1. 请提前20分钟从冰箱中取出shi剂he,ping衡zhishi温。

2. jiang浓缩洗涤液用双蒸水稀释(1:25)。未用完的放回4℃。从冰箱中取出的浓缩洗涤液可能you结晶,属于正常xian象,可用40℃水浴微加re使结晶完全溶解后zaipei制洗涤液(加re温度不要超过50℃,使用shi洗涤液应weishi温)。礲i帐褂谩Ⅻ/span>

3. 标准品10000×g离xin1分钟,加入标准品&样品稀释液1.0mLzhi冻干标准品中,旋紧管盖,静zhi10分钟,上下颠倒数ci,待其充分溶解后,用移液器jiang其轻轻混yun(浓度wei8000pg/mL)。然后根据需要进行倍bi稀释(注:不要zhi接在反应孔中进行倍bi稀释)。建议pei制成以下浓度:按照稀释方法tu例 标准品&样品稀释液zhi接作wei空白孔0ng/mL。rupei制5ng/mL标准品:取0.5mL10ng/mL的上述标准品加入含you0.5mL标准品&样品稀释液的EP管中,混yun即可,其余浓度依此lei推。 

4. 生物su化大发888zhen人ping台gong作液:实验前计算当ci实验所需用量(以100μL/孔计),实jipei制shi应duopei制100-200μL。使用前15分钟,以生物su化大发888zhen人ping台稀释液稀释浓缩生物su化大发888zhen人ping台(1:100)成gong作浓度。礲i帐褂谩Ⅻ/span>

5. 胒u岷衔飃ong作液:实验前计算当ci实验所需用量(以100μL/孔计),实jipei制shi应duopei制100-200μL。使用前15分钟,以胒u岷衔锵∈鸵合∈团ㄋ酎/span>HRP胒u岷衔铧/span>(1:100)成gong作浓度。

礲i帐褂谩Ⅻ/span>

谷丙转氨酶(ALT)shi剂he标准品稀释方法tu例:(以500μL/管wei例,ye可根据实ji用量来稀释,ru200μL/管)

            

1. 在各孔中加入标准品或样品各100μL 37℃孵育90分钟

2. 加入100μ生物su化大发888zhen人ping台gong作液,37℃孵育60分钟

3. 洗涤3ci

4. 加入100μL胒u岷衔飃ong作液, 37℃孵育30分钟

5. 洗涤5ci

6. 加入90μL底物溶液, 37℃孵育15分钟左右

7. 加入50μL终zhi液,li即在450nm波长处ce量ODzhi

8. 结果计算

yi、操作因su对ELISA结果的影xiangELISA操作步骤复za,操作不当jiang引起较大的误差。以下叙述各个步骤中的影xiang因su。

1.加样

2.温育

3.洗涤

4.显色

5.bi色

二、灰区的设zhi通常情况下,ELISA定性实验以“yang性”和“yin性”来报告结果,两者间youyitiao分界xian被称wei“yang性判秞ian怠保?/span>cut-off valueCOzhi),这是定性**ce定结果报告的依据。

三、标本复查ELISA蕑hiぜ靋e过程复za,影xiang因su较duo,即使shi内zhi控在控,ye可能因孔间差yier造成结果的差yi,因此加大复查力度是保证结果准确性祄u蒶ao方法,眗e缍狱/span>HBsAgHBeAgHCV-AbHIV-AbTP-Ab等项mu祄u梢伞⑷鮵ang性标本及少见moshi的检ce结果进行复查。

四、结果判断和报告常用下列ji种方法表示结果:

1.定性ce定

2.半定量ce定 结果yi般以滴度表示。

3.定量ce定 即用已知量的标准品作yixi列稀释后进行ELISAce定,绘制标准曲xian,结果襷a帕剂炕虻ノ槐硎尽T冱/span>ELISA定量检ce中每yi块反应板都bi须绘制相应的标准曲xian。

注意shi项:

zi细阅读说明书。

检查shi剂he标签蓌i膟ou效期。ru果超过you效期,请勿使用。

按说明书确定所youshi剂qi全(数量、ti积)。

标本制bei要规范,每份标本ti积要按2-3个复孔以蓌i牧恐芺ei(贮存),尽量分装做bei份。短期内wu法实验者,注意di温保存。

准bei好所you实验额wai所需物品,(眗e缫埔浩鳎瑂hi管,qing洗器,酶标仪)。

按说明书jiang所用shi剂ping衡zhishi温,根据检ce标本数量确定所需shi剂的量。

检查shi剂簒in诿恐謘hi剂的贮存tiao件,保证所youshi剂jun按照shi剂簒in谒得魇橥萍龅膖iao件存储。

检查不稳定或者变zhi的shi剂溶液(眗e鏲hen淀或变色)。youxieshi剂,眗e绫曜计废∈鸵夯蛘呒靋e稀释液,可能在设计shi就含youchen淀物。所youshi剂在滴入酶标板之前,bi需充分混yun。er由于chen淀物的特性,在加入酶标板之前,bi需不停搅拌。

保证充穤hi姆跤齭hi间和温度。

切勿使用不tong生chan批号的shi剂取daixianyoushi剂或混合xianyoushi剂。

在混合或溶解蛋白溶液shi,避免泡mochan生。

在实验kai始之前,安排好实验liu程。

在实验kai始之前,qing洁gong作台。

若you问题,应与wogong司或dai理shang的技shu支chi联xi

谷丙转氨酶(ALT)shi剂he结果判断:

1. 每个标准品的ODzhi减qu空白孔的ODzhi后作tu,ru设zhi复孔,ze应取其pingjunzhi计算。以标准品的浓度wei横坐标,ODzhiwei纵坐标,绘出标准曲xian。亦可以ODzhiwei横坐标,标准品的浓度wei纵坐标,绘出标准曲xian。

2. 推荐使用专ye的曲xian制作ruan件,rucurve expert 1.31.4,在ruan件界面既可根据样品ODzhi,由标准曲xian查出相应的浓度,乘以稀释倍数;亦可jiang样品的ODzhidai入标准曲xian的拟合方程shi,计算出样品浓度,zai乘以稀释倍数,即wei样品的实ji浓度。

3. 若样品ODzhi高于标准曲xian上限,应shi当稀释后重ce,计算浓度shi应乘以稀释倍数。 

谷丙转氨酶(ALT)shi剂heyou效期稳定性考cha

本shi验以谷丙转氨酶(ALT)wei例

1.  ODzhi:

正常保存tiao件下you效期内和超过you效期2个月所ceODzhibi较

正常you效期内ODzhi: 3.2512.8452.126, 1.859, 1.463, 1.022, 0.710, 0.08

超过2个月you效期ODzhi:3.1.7, 2.643, 2.125, 1.796, 1.453, 0.876, 0.432, 0.07

2.回shou率:穤hi鹩诙▃hi血qing及血浆中加入yi定量的谷丙转氨酶(ALT)标准品,重复ce定bing计算其品junzhi,回shou率weice定zhi与理论謉ang腷i率。

        正常保存tiao件下you效期内和过you效期2个月elisa shi剂he回shou率检ce结果

Sample

Conditions

Recovery range(%)

Average(%)

Serum(n=6)

normal

88-106

95

After 12 month

80-100

87

EDTA plasma(n=6)

normal

88-106

97

After 12 month

78-98

87

3. xian性:穤hi鹩诙▃hi血qing及血浆中加入yi定量的谷丙转氨酶(ALT)标准品,bingjiang标本按1:2,1:4,1:8稀释,xian性范围即wei稀释后样本中谷丙转氨酶(ALT)含量的ce定zhi与理论謉ang腷i率。

         正常保存tiao件下you效期内和过you效期2个月elisa shi剂he回xian性检ce结果

Sample

Conditions

1:2

1:4

1:8

Serum(n=6)

normal

81-92%

85-90%

89-105%

After 12month

80-88%

82-87%

87-101%

EDTA plasma(n=6)

normal

93-104%

81-97%

91-96%

After 12month

82-95%

75-82%

74-90%

4.  精密度:以样品ce定謉ang谋鋣ixi数CV表示。CV%=SD/meanx100

批内差:取tongyi批cishi剂he对dizhi,中zhi和高zhi样本进行定量检ce,每份样本ce定20ci,穤hi鸺扑悴籺ong浓度样本的pingjunzhi和SDzhi。

批间差:选取 3 个不tong批ci的shi剂he穤hi鸲詃i、中、高zhi定zhi样本进行定量ce定, 每个样本使用tongyishi剂he重复ce定 8 ci,穤hi鸺扑悴籺ong浓度样本的pingjunzhi及 SD zhi。(批内差: CV<10%;批间差: CV<11%)

       正常保存tiao件下you效期内和过you效期2个月elisa shi剂he回精密度检ce结果

                    Intra-assay precision

Conditions

normal

After 12month

normal

After 12month

normal

After 12month

sample

1

1

2

2

3

3

n

20

20

20

20

20

20

Mean(ng/ml)

16.68

14.22

70.25

62.36

369.75

327.88

SD

1.08

1.25

4.21

5.31

24.69

32.87

CV(%)

6.5

8.8

6.0

8.5

6.6

10

  

Conditions

normal

After 12month

normal

After 12month

normal

After 12month

Sample

1

1

2

2

3

3

n

20

20

20

20

20

20

Mean(ng/ml)

18.72

13.68

65.98

61.25

387.22

425.26

SD

1.45

1.52

4.83

5.18

28.49

36.87

CV%

7.7

11.1

7.3

8.5

7.3

8.7

谷丙转氨酶(ALT)shi剂hehui出xian的问题及解决办法:

1. 加入反应终zhi液后,没you吸光zhi或吸光zhi偏di。

a.原因:未加入酶标记物。

解决办法:请按照操作步骤进行。

b.原因:shi剂簒in谌菸镂茨艹浞只亍Ⅻ/span>

解决办法:确定shi剂簒in谌菸锘匚潞髗ai进行操作。

c.原因:shi温taidi。

解决办法:若shi温taidi(<19),请于操作步骤4,shi当延长温育shi间。

d.原因:未使用shi剂he的qing洗液qing洗。

解决办法: 请用shi剂簒in谒醙ong的qing洗液qing洗。

e.原因:shi剂he已过you效期限。

解决办法:请更换成仍在you效期限内的shi剂he。

2. 标准曲xianxian性不佳,或是ping行性不好。

a.原因:温育位zhi避光不好或shou到气liu干rao。

解决办法: 请确认温育位zhi既不透光ye不透风(ru抽屉内)

b.原因:操作shi间拖taijiu。

解决办法:请在方法熟练后zai进行操作。

c.原因:微孔间相互污染。

解决办法: 加样品shi,请小xin勿溅出微孔wai,以免造成其它微孔的污染。

d.原因:标准品或酶标记物所加入的量不yizhi。

解决办法:请使用已校正过的移液枪,bing确保其与吸头之间you高度密合性。

e.原因:添加样品或shi剂的操作方法不正确。

解决办法:加样品或shi剂shi,吸头请勿接触微孔。

f.原因:洗板过程发生问题(ru管路堵塞、洗完板后未li刻进行下yi步骤)

解决办法:请随shi监控洗板ji洗板过程,洗完后li即进行下yi步骤。

3. 吸光zhijun偏高(或xian性不够陡)

a.原因:shi温tai高(>25)

解决办法: 若wu法降dishi内温度,请shi当缩短步骤4的温育shi间。

b.原因:底物溶液shou到污染。

解决办法: 若发xian底物溶液已呈xiandan蓝色,请不要zai使用。

c.原因:反应shi间超过taijiu。

解决办法:请控制反应shi间。

d.原因:酶标记物污染了簒in谄渌黶hi剂。

解决办法:使用过的吸头应li即丢弃,可避免shi剂间相互污染,凡是shi剂(特bie是酶标记物与底物溶液)接触过的容器应li即qing洗干净。(xian以漂白水浸泡,zai以qing水冲洗干净,可确保wu残留)

4. yin性标准品的吸光zhidi于yang性标准品的吸光zhi。

a.原因:微孔中的shi剂未能充分混合。

解决办法: shi剂加完后,需轻敲盘四周使其充分混合junyun。

b.原因:洗板过程发生问题(tong2-f.)

解决办法:请参考2-f.

c.原因:添加样品或酶标记物的量不yizhi。

解决办法: 请参考2-d.

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