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ren芳基硫酸酯酶B(ARSB)试剂盒

如guonin对该大发888zhenrenappganxing趣的话,可yi
大发888zhenrenapp名称: ren芳基硫酸酯酶B(ARSB)试剂盒
大发888zhenrenapp型号: ARSB
大发888zhenrenapp展商: ELISA试剂盒
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简dan介绍

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ren芳基硫酸酯酶B(ARSB)试剂盒  的详xi介绍


ren芳基硫酸酯酶B(ARSB)试剂盒

使yongshuo明shu

ren芳基硫酸酯酶B(ARSB)试剂盒基本原理:

本试剂盒采yongshuang大发888zhenrenping台夹心ELISA法。yong抗renARSB大发888zhenrenping台bao被于酶标板上,实验时样品huo标准品中的renARSB与bao被大发888zhenrenping台结合,游离的成分被洗qu。襩ai渭尤肷锼鼗目箁enARSB大发888zhenrenping台和辣根guoyang化物酶标记的亲和素。抗renARSB大发888zhenrenping台与结合在bao被大发888zhenrenping台上的renARSB结合、生物素与亲和素te异性结合而形成**复合物,游离的成分被洗qu。加入显色di物(TMB),TMB在辣根guoyang化物酶的催化xia呈现蓝色,加终止yehou变成黄色。yong酶标yi在450nmbo长处测ODzhi,renARSBnong度与OD450zhi之间呈正比,通guo绘制标准曲线计算chu样品中renARSB的nong度。

ren芳基硫酸酯酶B(ARSB)试剂盒miao述:

ying文名称 Human ARSB (Arylsulfatase B) ELISA Kit
中文名称 ren芳基硫酸酯酶B(ARSB)酶联**吸附测定试剂盒
货号 X-EL-H0419c 种属 Human/ren
规格 96T/Kit (8*12 strips) 48T/Kit (8*6 strips)
检测方法 shuang大发888zhenrenping台夹心法
检测范围 0.156~10ng/mL 灵敏度 0.094ng/mL

试剂盒组成:

中文名称

ying文名称

规格

保存

  ELISA酶标板(可拆xie)

  Micro ELISA  Plate(Dismountable)

  8×12 / 8×6*

4/-20 #

冻干标准品

Reference Standard

  2/1 *

4/-20 #

标准品&样品稀释ye

Reference Standard & Sample Diluent

  1 20mL/12mL*

4

nong缩生物素化大发888zhenrenping台

Concentrated Biotinylated Detection Ab

  1 120μL/70μL*

4/-20 #

生物素化大发888zhenrenping台稀释ye

Biotinytated Detection Ab Diluent

  1 10mL/6mL*

4

nong缩HRP酶结合物

Concentrated HRP Conjugate

  1 120μL/70μL*

4(bi光)

酶结合物稀释ye

HRP Conjugate Diluent

  1 10mL/6mL*

4

nong缩洗diye(25×

ConcentratedWashBuffer (25×)

  1 30mL/16mL*

4

di物溶ye(TMB

Substrate Reagent

  1 10mL/6mL*

4(bi光)

反应终止ye

Stop Solution

  1 10mL/6mL*

4

封板fu膜

Plate Sealer

  5/3 zhang*

 

大发888zhenrenappshuo明shu

Product  Description

  1 

 

质检报告

Certificate of Analysis

  1 

 

te别shuo明
*: [96T/48T](打开bao装hou请及时检查所有物品是否齐全wanzheng)
#: 一周内使yong可存于4℃,xu长时间存fanghuo多磜en箉ong建议存于-20.                                      

ren芳基硫酸酯酶B(ARSB)试剂盒检测前准备工作:

1. 请提前20分zhong从冰xiang中取chu试剂盒,ping衡至shi温。

2. 将nong缩洗diyeyongshuang蒸shui稀释(1:25)。未yongwan的fang回4℃。从冰xiang中取chu的nong缩洗diye可能有结晶,属于正常现象,可yong40℃shui浴微加热使结晶wan全溶解hou再配制洗diye(加热温度不要超guo50℃,使yong时洗diye应为shi温)。dang日使yong。

3. 标准品10000×g离心1分zhong,加入标准品&样品稀释ye1.0mL至冻干标准品中,旋jin管盖,静置10分zhong,上xia颠dao数次,待其充分溶解hou,yong移ye器将其轻轻hun匀(nong度为8000pg/mL)。然hou根据xu要进行bei比稀释(zhu:不要直接在反应孔中进行bei比稀释)。建议配制成yixianong度:按zhao稀蕋ou椒ㄍ糽i 标准品&样品稀释ye直接作为空白孔0ng/mL。如配制5ng/mL标准品:取0.5mL10ng/mL的上述标准品加入含有0.5mL标准品&样品稀释ye的EP管中,hun匀即可,其余nong度襩ai死嗤啤Ⅻ/span> 

4. 生物素化大发888zhenrenping台工作ye:实验前计算dang磜en笛樗鵻uyong量(yi100μL/孔计),实ji配制时应多配制100-200μL。使yong前15分zhong,yi生物素化大发888zhenrenping台稀释ye稀释nong缩生物素化大发888zhenrenping台(1:100)成工作nong度。dang日使yong。

5. 酶结合物工作ye:实验前计算dang磜en笛樗鵻uyong量(yi100μL/孔计),实ji配制时应多配制100-200μL。使yong前15分zhong,yi酶结合物稀释ye稀释nong缩HRP酶结合物(1:100)成工作nong度。

dang日使yong。

ren芳基硫酸酯酶B(ARSB)试剂盒标准品稀蕋ou椒ㄍ糽i:(yi500μL/管为li,也可根据实jiyong量lai稀释,如200μL/管)

            

1. 在各孔中加入标准品huo样品各100μL 37℃孵yu90分zhong

2. 加入100μ生物素化大发888zhenrenping台工作ye,37℃孵yu60分zhong

3. 洗di3

4. 加入100μL酶结合物工作ye, 37℃孵yu30分zhong

5. 洗di5

6. 加入90μLdi物溶ye, 37℃孵yu15分zhong左右

7. 加入50μL终止ye,立即在450nmbo长处测量ODzhi

8. 结guo计算

一、操作因素对ELISA结guo的影响ELISA操作步zhou复杂,操作不dang将引起较大的误差。yixiaxu述各个步zhou中的影响因素。

1.加样

2.温yu

3.洗di

4.显色

5.比色

二、粂i膕he置通常情况xia,ELISA定性实验yi“阳性”和“阴性”lai报告结guo,两zhe间有一条分界线被称为“阳性舩ie蟴hi”(cut-off valueCOzhi),zhe是定性**测定结guo报告的依据。

san、标本复查ELISA手工检测guo程复杂,影响因素较多,即使shi内质kong在kong,也可能因孔间差异而zao成结guo的差异,因ci加大复查力度是保zheng结guo准确性的可kao方法,比如对HBsAgHBeAgHCV-AbHIV-AbTP-Ab等项目的可疑、ruo阳性标本及少见模式的检测结guo进行复查。

四、结guo舩ie虾捅ǜ娉ongxia列几种方法表shi结guo:

1.定性测定

2.半定量测定 结guo一般yi滴度表shi。

3.定量测定 即yongyi知量的标准品作一系列稀释hou进行ELISA测定,绘制标准曲线,结guoyi优良量huodan位表shi。在ELISA定量检测中每一块反应板都必须绘制相应的标准曲线。

zhu意事项:

仔xiyue读shuo明shu。

检查试剂盒标签上的有效期。如guo超guo有效期,请wu使yong。

癱i得鱯hu确定所有试剂齐全(数量、体积)。

标本制备要规范,每份标本体积要按2-3个复孔yi上的量制备(贮存),尽量分装做备份。短期内无法实验zhe,zhu意低温保存。

准备好所有实验额外所xu物品,(比如移ye器,试管,清洗器,酶标yi)。

癱i得鱯hu将所yong试剂ping衡至shi温,根据检测标本数量确定所xu试剂的量。

检查试剂盒内每种试剂的贮存条jian,保zheng所有试剂均按zhao试剂盒内shuo明shu推荐的条jian存chu。

检查不wen定huozhe变质的试剂溶ye(比如沉dianhuo变色)。有些试剂,比如标准品稀释yehuozhe检测稀释ye,可能在she计时就含有沉dian物。所有试剂在祑en朊副臧逯埃豿u充分hun匀。而由于沉dian物的te性,在加入酶标板之前,必xu不停jiao拌。

保zheng充穤hi姆鮵u时间和温度。

切wu使yong不同生产批号的试剂取代蟴hong惺约羑uohun合蟴hong惺约痢Ⅻ/span>

在hun合huo溶解蛋白溶ye时,bi免泡沫产生。

在实验开始之前,an排好实验流程。

在实验开始之前,清洁工作台。

若有wenti,应与我公司huo代理商的jishu支持联系

ren芳基硫酸酯酶B(ARSB)试剂盒结guo舩ie吸/span>:

1. 每个标准品的ODzhi减qu空白孔的ODzhihou作图,如she置复孔,则应取其ping均zhi计算。yi标准品的nong度为横坐标,ODzhi为纵坐标,绘chu标准曲线。亦可yiODzhi为横坐标,标准品的nong度为纵坐标,绘chu标准曲线。

2. 推荐使yongzhuan业的曲线制作软jian,如curve expert 1.3huo1.4,在软jian界mian既可根据样品ODzhi,由标准曲线查chu相应的nong度,乘yi稀释bei数;亦可将样品的ODzhi代入标准曲线的ni合方程式,计算chu样苀angǘ龋俪藋i稀释bei数,即为样品的实jinong度。

3. 若样品ODzhi高于标准曲线上xian,应shidang稀释houzhong测,计算nong度时应乘yi稀释bei数。 

ren芳基硫酸酯酶B(ARSB)试剂盒有效期wen定性考察

本试验yi芳基硫酸酯酶B(ARSB)为li

1.  ODzhi:

正常保存条jianxia有效期内和超guo有效期2个月所测OD謉ang冉吸/span>

正常有效期内ODzhi: 3.2512.8452.126, 1.859, 1.463, 1.022, 0.710, 0.08

超guo2个月有效期ODzhi:3.1.7, 2.643, 2.125, 1.796, 1.453, 0.876, 0.432, 0.07

2.回收率:分别于定zhi血清及血浆中加入一定量的芳基硫酸酯酶B(ARSB)标准品,zhong复测定并计算其品均zhi,回收率为测定謉i肜砺踷hi的比率。

        正常保存条jianxia有效期内和guo有效期2个月elisa 试剂盒回收率检测结guo

Sample

Conditions

Recovery range(%)

Average(%)

Serum(n=6)

normal

88-106

95

After 12 month

80-100

87

EDTA plasma(n=6)

normal

88-106

97

After 12 month

78-98

87

3. 线性:分别于定zhi血清及血浆中加入一定量的芳基硫酸酯酶B(ARSB)标准品,并将标本按1:2,1:4,1:8稀释,线性范围即为稀释hou样本中芳基硫酸酯酶B(ARSB)含量的测定謉i肜砺踷hi的比率。

         正常保存条jianxia有效期内和guo有效期2个月elisa 试剂盒回线性检测结guo

Sample

Conditions

1:2

1:4

1:8

Serum(n=6)

normal

81-92%

85-90%

89-105%

After 12month

80-88%

82-87%

87-101%

EDTA plasma(n=6)

normal

93-104%

81-97%

91-96%

After 12month

82-95%

75-82%

74-90%

4.  精密度:yi样品测定zhi的变异系数CV表shi。CV%=SD/meanx100

批内差:取同一批磜en约梁xie缘蛕hi,中zhi和高zhi样本进衳ie考觳猓糠菅静舛?span>20次,分别计算不同nong度样本的ping均zhi和SDzhi。

批间差:xuan取 3 个不同批次的试剂盒分别对低、謝iao⒏遺hi定zhi样本进衳ie坎舛ǎ 每个样本使yong同一试剂盒zhong复测定 8 次,分别计算不同nong度样本的ping均zhi及 SD zhi。(批内差: CV<10%;批间差: CV<11%)

       正常保存条jianxia有效期内和guo有效期2个月elisa 试剂盒回精密度检测结guo

                    Intra-assay precision

Conditions

normal

After 12month

normal

After 12month

normal

After 12month

sample

1

1

2

2

3

3

n

20

20

20

20

20

20

Mean(ng/ml)

16.68

14.22

70.25

62.36

369.75

327.88

SD

1.08

1.25

4.21

5.31

24.69

32.87

CV(%)

6.5

8.8

6.0

8.5

6.6

10

  

Conditions

normal

After 12month

normal

After 12month

normal

After 12month

Sample

1

1

2

2

3

3

n

20

20

20

20

20

20

Mean(ng/ml)

18.72

13.68

65.98

61.25

387.22

425.26

SD

1.45

1.52

4.83

5.18

28.49

36.87

CV%

7.7

11.1

7.3

8.5

7.3

8.7

ren芳基硫酸酯酶B(ARSB)试剂盒huichu蟴hi膚enti及解决办法:

1. 加入反应终止yehou,没有吸光zhihuo吸光zhi偏低。

a.原因:未加入酶标记物。

解决办法:请按zhao操作步zhou进衳iaoⅫ/span>

b.原因:试剂盒内容物未能充分回。

解决办法:确定试剂盒内容物回温hou再进行操作。

c.原因:shi温太低。

解决办法:若shi温太低(<19),请于操作步zhou4,shidang延长温yu时间。

d.原因:未使yong试剂盒的清洗ye清洗。

解决办法: 请yong试剂盒内所提供的清洗ye清洗。

e.原因:试剂盒yiguo有效期xian。

解决办法:请更换成仍在有效期xian内的试剂簒iaoⅫ/span>

2. 标准曲线线性不佳,huo是ping行性不好。

a.原因:温yu位置bi光不好huo受到气流干扰。

解决办法: 请确认温yu位置既不透光也不透风(如抽屉内)

b.原因:操作时间拖太久。

解决办法:请在方法熟练hou再进行操作。

c.原因:微孔间相互污染。

解决办法: 加样品时,请xiao心wu溅chu微孔外,yi免zao成其它微孔的污染。

d.原因:标准品huo酶标记物所加入的量不一zhi。

解决办法:请使yongyi校正guo的移ye枪,并确保其与吸tou之间有高度密合性。

e.原因:添加样品huo试剂的操作方法不正确。

解决办法:加样品huo试剂时,吸tou请wu接触微孔。

f.原因:洗板guo程发生wenti(如管路堵塞、洗wan板hou未立刻进行xia一步zhou)

解决办法:请随时监kong洗板机洗板guo程,洗wanhou立即进行xia一步zhou。

3. 吸光zhi均偏高(huo线性不够陡)

a.原因:shi温太高(>25)

解决办法: 若无法降低shi内温度,请shidang缩短步zhou4的温yu时间。

b.原因:di物溶ye受到污染。

解决办法: 若发现di物溶yeyi呈蟴hi渡氩灰偈箉ong。

c.原因:反应时间超guo太久。

解决办法:请kong制反应时间。

d.原因:酶标记物污染liao盒内其它试剂。

解决办法:使yongguo的吸tou应立即丢弃,可bi免试剂间相互污染,凡是试剂(te别蕅iao副昙俏镉雂i物溶ye)接触guo的容器应立即清洗干净。(先yi漂白shui浸泡,再yi清shui冲洗干净,可确保无残留)

4. 阴性标准品的吸光zhi低于阳性标准品的吸光zhi。

a.原因:微孔中的试剂未能充分hun合。

解决办法: 试剂加wanhou,xu轻qiao盘四周使其充分hun合均匀。

b.原因:洗板guo程发生wenti(2-f.)

解决办法:请参考2-f.

c.原因:添加样品huo酶标记物的量不一zhi。

解决办法: 请参考2-d.

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