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人嗜ge蛋白B(CHGB)试jihe

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dafa888真人app名称: 人嗜ge蛋白B(CHGB)试jihe
dafa888真人app型hao: CHGB
dafa888真人app展shang: ELISA试jihe
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简单介绍

狗万


人嗜ge蛋白B(CHGB)试jihe  de详细介绍


嗜ge蛋白B(CHGB)试jihe

使用说ming书

嗜ge蛋白B(CHGB)试jihe基本原理:

本试jihe采用shuangdafa888真人平台夹心ELISA法。用抗人CHGBdafa888真人平台包被于酶标ban上,实yanshi样品huo标准品中de人CHGB与包被dafa888真人平台jie合,游离de成穤hi幌慈ァi次加入生wu素化de抗人CHGBdafa888真人平台和辣根过氧化wu酶标记de亲和素。抗人CHGBdafa888真人平台与jie合zai包被dafa888真人平台上de人CHGBjie合、生wu素与亲和素特异xingjie合而xing成**复合wu,游离de成穤hi幌慈ァ<尤胂陨譿u(TMB),TMBzai辣根过氧化wu酶de催化xia呈现蓝色,加终止液后变成黄色。用酶标仪zai450nm波changchu测OD值,人CHGB浓度与OD450值之间呈正比,tong过绘zhi标准曲线计算出样品中人CHGBde浓度。

嗜ge蛋白B(CHGB)试jihe描述:

英文名称 Human CHGB (Chromogranin B) ELISA Kit
謝ing拿劈/span> 人嗜ge蛋白B(CHGB)酶联**吸附测定试jihe
货hao X-EL-H0832c 种shu Human/人
规格 96T/Kit (8*12 strips) 48T/Kit (8*6 strips)
检测方法 shuangdafa888真人平台夹心法
检测范wei 62.5~4000pg/mL 灵敏度 37.5pg/mL

试jihe组成:

謝ing拿劈/span>

英文名称

规格

保存

  ELISA酶标ban(可拆卸)

  Micro ELISA  Plate(Dismountable)

  8×12 / 8×6*

4/-20 #

冻gan标准品

Reference Standard

  2/1 *

4/-20 #

标准品&样品稀释液

Reference Standard & Sample Diluent

  1 20mL/12mL*

4

浓缩生wu素化dafa888真人平台

Concentrated Biotinylated Detection Ab

  1 120μL/70μL*

4/-20 #

生wu素化dafa888真人平台稀释液

Biotinytated Detection Ab Diluent

  1 10mL/6mL*

4

浓缩HRP酶jie合wu

Concentrated HRP Conjugate

  1 120μL/70μL*

4(避光)

酶jie合wu稀释液

HRP Conjugate Diluent

  1 10mL/6mL*

4

浓缩洗涤液(25×

ConcentratedWashBuffer (25×)

  1 30mL/16mL*

4

底wu溶液(TMB

Substrate Reagent

  1 10mL/6mL*

4(避光)

反ying终止液

Stop Solution

  1 10mL/6mL*

4

封ban覆膜

Plate Sealer

  5/3 *

 

dafa888真人app说ming书

Product  Description

  1 

 

謘hi毂ǜ妩/span>

Certificate of Analysis

  1 

 

特别说ming
*: [96T/48T](打开包装后qing及shi检查所觴ing锲穝hi否齐全完整)
#: 一周内使用可存于4℃,需changshi间存放huo多磜en褂媒ㄒ榇嬗冱/span>-20.                                      

嗜ge蛋白B(CHGB)试jihe检测前准备工作:

1. qing提前20分钟从冰箱中取出试jihe,平衡至shi蝜ongⅫ/span>

2. 将浓缩洗涤液用shuang蒸水稀释(1:25)。未用完de放回4℃。从冰箱中取出de浓缩洗涤液可neng有jie晶,shu于正常现象,可用40℃水浴微加热使jie晶完全溶解后zai配zhi洗涤液(加热温度不要超过50℃,使用shi洗涤液ying为shi温)。当日使用。

3. 标准品10000×g离心1分钟,加入标准品&样品稀释液1.0mL至冻gan标准品中,旋紧管gai,静置10分钟,上xia颠倒数次,dai其chong分溶解后,用移液器将其qingqing混yun(浓度为8000pg/mL)。ran后根据需要进行倍比稀释(zhu:不要zhi接zai反ying孔中进行倍比稀释)。建议配zhi成以xia浓度:an照稀释方法图例 标准品&样品稀释液zhi接作为空白孔0ng/mL。ru配zhi5ng/mL标准品:取0.5mL10ng/mLde上述标准品加入han有0.5mL标准品&样品稀释液deEP管中,混yun即可,其余浓度yicileitui。 

4. 生wu素化dafa888真人平台工作液:实yan前计算当磜en祔an所需用量(以100μL/孔计),实际配zhishiying多配zhi100-200μL。使用前15分钟,以生wu素化dafa888真人平台稀释液稀释浓缩生wu素化dafa888真人平台(1:100)成工作浓度。当日使用。

5. 酶jie合wu工作液:实yan前计算当磜en祔an所需用量(以100μL/孔计),实际配zhishiying多配zhi100-200μL。使用前15分钟,以酶jie合wu稀释液稀释浓缩HRP酶jie合wu(1:100)成工作浓度。

当日使用。

嗜ge蛋白B(CHGB)试jihe标准品稀释方法图例:(以500μL/管为例,也可根据实际用量lai稀释,ru200μL/管)

            

1. zai各孔中加入标准品huo样品各100μL 37℃孵育90分钟

2. 加入100μ生wu素化dafa888真人平台工作液,37℃孵育60分钟

3. 洗涤3

4. 加入100μL酶jie合wu工作液, 37℃孵育30分钟

5. 洗涤5

6. 加入90μL底wu溶液, 37℃孵育15分钟左右

7. 加入50μL终止液,立即zai450nm波changchu测量OD

8. jie果计算

一、操作因素对ELISAjie果de影响ELISA操作步骤复杂,操作不当将引起较dadewucha。以xia叙述各个步骤中de影响因素。

1.加样

2.温育

3.洗涤

4.显色

5.比色

二、灰qude设置tong常情况xia,ELISA定xing实yan以“阳xing”和“阴xing”lai报告jie果,两者间有一条分jie线被称为“阳xing判断值”(cut-off valueCO值),这shi定xing**测定jie果报告deyi据。

san、标本复查ELISA手工检测过程复杂,影响因素较多,即使shi内质控zai控,也可neng因孔间cha异而造成jie果decha异,因ci加da复查力度shi保证jie果准确xingde可靠方法,比ru对HBsAgHBeAgHCV-AbHIV-AbTP-Ab等项mude可yi、ruo阳xing标本及少见模式de检测jie果进行复查。

四、jie果判断和报告常用xia列几謟hi椒╞iao示jie果:

1.定xing测定

2.半定量测定 jie果襤ua阋缘味萣iao蔶inⅫ/span>

3.定量测定 即用已知量de标准品作一系列稀释后进行ELISA测定,绘zhi标准曲线,jie果以优liang量huo单位biao蔶inaiELISA定羕ao觳庵忻恳籯uai反yingban都必须绘zhi相yingde标准曲线。

zhu意事项:

仔细阅读说ming书。

检查试jihe标qian上de有效期。ru果超过有效期,qingwu使用。

an说ming书确定所有试ji齐全(数量、体积)。

标本zhi备要规范,每份标本体积要an2-3个复孔以上de量zhi备(贮存),jin量穤hong白霰阜荨6唐谀趙u法实yan者,zhu意低温保存。

准备好所有实yan额外所需wu品,(比ru移液器,试管,清洗器,酶标仪)。

an说ming书将所用试ji平衡至shi温,根据检测标本数量确定所需试jide量。

检查试jihe内每种试jide贮存条件,保证所有试ji均an照试jihe内说ming书tui荐de条件存储。

检查不稳定huo者变质de试ji溶液(比ru沉淀huo变色)。有xie试ji,比ru标准品稀释液huo者检测稀释液,可nengzai设计shi就han有沉淀wu。所有试jizai滴入酶标ban之前,必需chong分混yun。而由于沉淀wude特xing,zai加入酶标ban之前,必需不停搅拌。

保证chong分de孵育shi间和温度。

切wu使用不同生chan批haode试ji取代现有试jihuo混合现有试ji。

zai混合huo溶解蛋白溶液shi,避mian泡沫chan生。

zai实yan开shi之前,an排好实yanliu程。

zai实yan开shi之前,清洁工作台。

若有wen题,ying与我公薺ing虼韘hangde技术支持联系

嗜ge蛋白B(CHGB)试jihejie果判断:

1. 每个标准品deOD值减去空白孔deOD值后作图,ru设置复孔,则ying取其平均值计算。襶uan曜计穌e浓度为横zuo标,OD值为纵zuo标,绘出标准曲线。亦可以OD值为横zuo标,标准品de浓度为纵zuo标,绘出标准曲线。

2. tui荐使用专业de曲线zhi作ruan件,rucurve expert 1.3huo1.4,zairuan件jiemian既可根据样品OD值,由标准曲线查出相yingde浓度,cheng以稀释倍数;亦可将样品deOD值代入标准曲线deni合方程式,计算出样品浓度,zaicheng以稀释倍数,即为样品de实际浓度。

3. 若样品OD值高于标准曲线上限,ying适当稀释后zhong测,计算浓度shiyingcheng以稀释倍数。 

嗜ge蛋白B(CHGB)试jihe有效期稳定xingkaocha

本试yan以嗜ge蛋白B(CHGB)为例

1.  OD值:

正常保存条件xia有效期内和超过有效期2个月所测OD值比较

正常有效期内OD值: 3.2512.8452.126, 1.859, 1.463, 1.022, 0.710, 0.08

超过2个月有效期OD值:3.1.7, 2.643, 2.125, 1.796, 1.453, 0.876, 0.432, 0.07

2.回收lv:穤hi鹩诙ㄖ笛寮把屑尤胍欢縟e嗜ge蛋白B(CHGB)标准品,zhong复测定并计算其品均值,回收lv为测定值与理lun值de比lv。

        正常保存条件xia有效期内和过有效期2个月elisa 试jihe回收聅hi觳鈐ie果

Sample

Conditions

Recovery range(%)

Average(%)

Serum(n=6)

normal

88-106

95

After 12 month

80-100

87

EDTA plasma(n=6)

normal

88-106

97

After 12 month

78-98

87

3. 线xing:穤hi鹩诙ㄖ笛寮把屑尤胍欢縟e嗜ge蛋白B(CHGB)标准品,并将标本an1:2,1:4,1:8稀释,线xing范wei即为稀释后样本中嗜ge蛋白B(CHGB)han量de测定值与理lun值de比lv。

         正常保存条件xia有效期内和过有效期2个月elisa 试jihe回线xing检测jie果

Sample

Conditions

1:2

1:4

1:8

Serum(n=6)

normal

81-92%

85-90%

89-105%

After 12month

80-88%

82-87%

87-101%

EDTA plasma(n=6)

normal

93-104%

81-97%

91-96%

After 12month

82-95%

75-82%

74-90%

4.  精密度:以样品测定值de变异系数CVbiao蔶inⅫ/span>CV%=SD/meanx100

批内cha:取同一批磜en詊ihe对低值,中值和高值样本进行定羕ao觳猓糠菅静舛?span>20次,穤hi鸺扑悴煌ǘ妊綿e平均值和SD值。

批间cha:选取 3 个不同批次de试jihe穤hi鸲缘汀⒅xiao⒏咧刀ㄖ笛窘卸坎舛ǎ 每个样本使用同一试jihezhong复测定 8 次,穤hi鸺扑悴煌ǘ妊綿e平均值及 SD 值。(批内cha: CV<10%;批间cha: CV<11%)

       正常保存条件xia有效期内和过有效期2个月elisa 试jihe回精密度检测jie果

                    Intra-assay precision

Conditions

normal

After 12month

normal

After 12month

normal

After 12month

sample

1

1

2

2

3

3

n

20

20

20

20

20

20

Mean(ng/ml)

16.68

14.22

70.25

62.36

369.75

327.88

SD

1.08

1.25

4.21

5.31

24.69

32.87

CV(%)

6.5

8.8

6.0

8.5

6.6

10

  

Conditions

normal

After 12month

normal

After 12month

normal

After 12month

Sample

1

1

2

2

3

3

n

20

20

20

20

20

20

Mean(ng/ml)

18.72

13.68

65.98

61.25

387.22

425.26

SD

1.45

1.52

4.83

5.18

28.49

36.87

CV%

7.7

11.1

7.3

8.5

7.3

8.7

嗜ge蛋白B(CHGB)试jihe会出现dewen题及解决办法:

1. 加入反ying终止液后,没觴ing庵礹uo吸光值偏低。

a.原因:未加入酶标记wu。

解决办法:qingan照操作步骤进衳iaoⅫ/span>

b.原因:试jihe内容wu未nengchong分回。

解决办法:确定试jihe内容wu回温后zai进行操作。

c.原因:shi温太低。

解决办法:若shi温太低(<19),qing于操作步骤4,适当延chang温育shi间。

d.原因:未使用试jihede清洗液清洗。

解决办法: qing用试jihe内所提供de清洗液清洗。

e.原因:试jihe已过有效期限。

解决办法:qing更换成仍zai有效期限内de试ji簒iaoⅫ/span>

2. 标准曲线线xing不佳,huoshi平行xing不好。

a.原因:温育位置避光不好huo受daoqiliugan扰。

解决办法: qing确认温育位置既不透光也不透feng(ru抽屉内)

b.原因:操作shi间拖太久。

解决办法:qingzai方法熟练后zai进行操作。

c.原因:微孔间相互污萰inⅫ/span>

解决办法: 加样品shi,qingxiao心wujian出微孔外,以mian造成其它微孔de污萰inⅫ/span>

d.原因:标准品huo酶标记wu所加入de量不一謑ongⅫ/span>

解决办法:qing使用已校正过de移液枪,并确保其与吸头之间有高度密合xing。

e.原因:添加样品huo试jide操作方法不正确。

解决办法:加样品huo试jishi,吸头qingwu接触微孔。

f.原因:洗ban过程fa生wen题(ru管lu堵塞、洗完ban后未立ke进行xia一步骤)

解决办法:qing随shi监控洗ban机洗ban过程,洗完后立即进行xia一步骤。

3. 吸光值均偏高(huo线xing不goudou)

a.原因:shi温太高(>25)

解决办法: 若wu法jiang低shi内温度,qing适当缩短步骤4de温育shi间。

b.原因:底wu溶液受dao污萰inⅫ/span>

解决办法: 若fa现底wu溶液已呈现dan蓝色,qing不要zai使用。

c.原因:反yingshi间超过太久。

解决办法:qing控zhi反yingshi间。

d.原因:酶标记wu污染了he内其它试ji。

解决办法:使用过de吸头ying立即ding弃,可避mian试糽iang湎嗷ノ廴荆瞫hi试ji(特别shi酶标记wu与底wu溶液)接触过de容器ying立即清洗ganjing。(先以漂白水浸泡,zai以清水chong洗ganjing,可确保wucan留)

4. 阴xing标准品de吸光值低于阳xing标准品de吸光值。

a.原因:微孔中de试ji未nengchong分混合。

解决办法: 试糽iang油旰螅鑡ing敲盘四周使其chong分混合均yun。

b.原因:洗ban过程fa生wen题(2-f.)

解决办法:qingcankao2-f.

c.原因:添加样品huo酶标记wude量不一謑ongⅫ/span>

解决办法: qingcankao2-d.

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