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人巨噬细胞jiluo刺ji因zi(MCSF)试剂he

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dafa888真人app名称: 人巨噬细胞jiluo刺ji因zi(MCSF)试剂he
dafa888真人appxing号: MCSF
dafa888真人app展商: ELISA试剂he
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简dan介绍

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人巨噬细胞jiluo刺ji因zi(MCSF)试剂he  的详蟜u樯埸/font>


巨噬细胞jiluo刺ji因zi(MCSF)试剂he

shiyong说ming书

巨噬细胞jiluo刺ji因zi(MCSF)试剂heji本yuan理:

本试剂he采yong双dafa888真人平台夹xinELISA法。yong抗人MCSFdafa888真人平台包被于mei标板上,实验时样品huo标譲i分械娜薓CSF与包被dafa888真人平台结合,游离的cheng分被洗去。依次加入生wu素化的抗人MCSFdafa888真人平台和辣根过氧化wumei标记的亲和素。抗人MCSFdafa888真人平台与结合zai包被dafa888真人平台上的人MCSF结合、生wu素与亲和素特异性结合而形cheng**复合wu,游离的cheng分被洗去。加入显色底wu(TMB),TMBzai辣根过氧化wumei的cui化下呈xianlan色,加终止液后变cheng黄色。yongmei标仪zai450nm波长处ceOD值,人MCSF浓度与OD450值之间呈正比,通过绘zhi标准quxianji算出样品中人MCSF的浓度。

巨噬细胞jiluo刺ji因zi(MCSF)试剂he描述:

英文名称 Human MCSF (Macrophage Colony Stimulating Factor 1) ELISA Kit
中文名称 人巨噬细胞jiluo刺ji因zi(MCSF)mei联**吸fuceding试剂he
货号 X-EL-H0097c 种属 Human/人
规格 96T/Kit (8*12 strips) 48T/Kit (8*6 strips)
检cefang法 双dafa888真人平台夹xin法
检ce范wei 31.25~2000pg/mL 灵min度 18.75pg/mL

试剂he组cheng:

中文名称

英文名称

规格

保存

  ELISAmei标板(可拆xie)

  Micro ELISA  Plate(Dismountable)

  8×12 / 8×6*

4/-20 #

冻干标譲i饵/span>

Reference Standard

  2/1 *

4/-20 #

标譲i饵/span>&样品稀释液

Reference Standard & Sample Diluent

  1 20mL/12mL*

4

浓缩生wu素化dafa888真人平台

Concentrated Biotinylated Detection Ab

  1 120μL/70μL*

4/-20 #

生wu素化dafa888真人平台稀释液

Biotinytated Detection Ab Diluent

  1 10mL/6mL*

4

浓缩HRPmei结合wu

Concentrated HRP Conjugate

  1 120μL/70μL*

4(避光)

mei结合wu稀释液

HRP Conjugate Diluent

  1 10mL/6mL*

4

浓缩洗涤襤ai?/span>25×

ConcentratedWashBuffer (25×)

  1 30mL/16mL*

4

底wu溶襤ai?/span>TMB

Substrate Reagent

  1 10mL/6mL*

4(避光)

反应终止液

Stop Solution

  1 10mL/6mL*

4

封板竎ai|/span>

Plate Sealer

  5/3 *

 

dafa888真人app说ming书

Product  Description

  1 

 

质检报告

Certificate of Analysis

  1 

 

特bie说ming
*: [96T/48T](打开包装后qing及时检cha所有wu品是否齐全完整)
#: 一周内shiyong可存于4℃,需长时间存放huoduo次shiyong建议存于-20.                                      

巨噬细胞jiluo刺ji因zi(MCSF)试剂he检ce莃ai急腹ぷ鳇/span>:

1. qing提前20分钟从冰箱中取出试剂he,平heng至室温。

2. 将浓缩洗涤液yong双蒸水稀释(1:25)。未yong完的放hui4℃。从冰箱中取出的浓缩洗涤液可能有结晶,属于正常xian象,可yong40℃水浴微加热shi结晶完全溶解后再配zhi洗涤襤ai尤任露炔灰?/span>50℃,shiyong时洗涤液应为室温)。当日shiyong。

3. 标譲i饵/span>10000×g离xin1分钟,加入标譲i饵/span>&样品稀释液1.0mL至冻干标譲i分校瑇uan紧管盖,静置10分钟,上下dian倒shu次,dai其充分溶解后,yong移液qi将其轻轻混匀(浓度为8000pg/mL)。然后根据需要进行倍眗en∈tingㄗⅲ翰灰眏iezai反应孔中进行倍眗en∈ting=ㄒ榕鋤hicheng以下浓度:按照稀释fang法图li 标譲i饵/span>&样品稀释液直jie作为空bai孔0ng/mL。ru配zhi5ng/mL标譲i罚喝狘/span>0.5mL10ng/mL的上述标譲i芳尤牒宵/span>0.5mL标譲i饵/span>&样品稀释液的EP管中,混匀即可,其余浓度依此类tui。 

4. 生wu素化dafa888真人平台工作襤ai菏笛榍癹i算当次实验所需yong量(以100μL/孔ji),实际配zhi时应duo配zhi100-200μL。shiyong前15分钟,以生wu素化dafa888真人平台稀释液稀释浓缩生wu素化dafa888真人平台(1:100)cheng工作浓度。当日shiyong。

5. mei结合wu工作襤ai菏笛榍癹i算当次实验所需yong量(以100μL/孔ji),实际配zhi时应duo配zhi100-200μL。shiyong前15分钟,以mei结合wu稀释液稀释浓缩HRPmei结合wu(1:100)cheng工作浓度。

当日shiyong。

巨噬细胞jiluo刺ji因zi(MCSF)试剂he标譲i废∈蚮ang法图liaiㄒ狱/span>500μL/管为li,也可根据实际yong量来稀蕋ing瑀u200μL/管)

            

1. zai各孔中加入标譲i穐uo样品各100μL 37℃孵育90分钟

2. 加入100μ生wu素化dafa888真人平台工作襤ai?/span>37℃孵育60分钟

3. 洗涤3

4. 加入100μLmei结合wu工作襤ai?/span> 37℃孵育30分钟

5. 洗涤5

6. 加入90μL底wu溶襤ai?/span> 37℃孵育15分钟zuo右

7. 加入50μL终止襤ai⒓磟ai450nm波长处ce量OD

8. 结果ji算

一、操作因素对ELISA结果的影xiangELISA操作步骤复杂,操作不当将引起较da的误差。以下叙述各个步骤中的影xiang因素。

1.加样

2.温育

3.洗涤

4.显色

5.比色

二、灰区的设置通常qingkuang下,ELISAding性实验以“阳性”和“阴性”来报告结果,两者间有一条分界xian被称为“阳性舩iexian怠保?/span>cut-off valueCO值),zhe是ding性**ceding结果报告的依据。

san、标本复chaELISA手工检ce过程复杂,影xiang因素较duo,即shi室内质控zai控,也可能因孔间差异而造cheng结果的差异,因此加da复chali度是保证结果准确性的可靠fang法,比ru对HBsAgHBeAgHCV-AbHIV-AbTP-Ab祌en钅康目梢伞⑷跹粜员瓯炯吧偌J降募靋e结果进行复cha。

四、结果舩ie虾捅ǜ娉ong下列几謟hi椒ū硎窘峁裹/span>

1.ding性ceding

2.半ding量ceding 结果一般以滴度表示。

3.ding量ceding 即yongyizhi量的标譲i纷饕幌盗邢∈秃蠼宵/span>ELISAceding,绘zhi标准quxian,结果以优良量huodan位表示。zaiELISAding量检ce中每一kuai反应板du必xu绘zhi相应的标准quxian。

注意事项:

仔细yue读说ming书。

检cha试剂he标签上的有效qi。ru果超过有效qi,qing勿shiyong。

按说ming书确ding所有试剂齐全(shu量、ti积)。

标本zhi备要规范,每份标本ti积要按2-3个复孔以上的量zhi备(贮存),尽量穤hongbai霰阜荨6蘱i内无法实验者,注意di温保存。

准备hao所有实验额外所需wu品,(比ru移液qi,试管,清洗qi,mei标仪)。

按说ming书将所yong试剂平heng至室温,根据检ce标本shu量确ding所需试剂的量。

检cha试剂he内每种试剂的贮存条jian,保证所有试剂均按照试剂he内说ming书tui荐的条jian存储。

检cha不稳dinghuo者变质的试剂溶襤aiū萺u沉淀huo变色)。有些试剂,比ru标譲i废∈鸵篽uo者检ce稀释襤ai赡躾ai设ji时就含有沉淀wu。所有试剂zai滴入mei标板之前,必需充分混匀。而由于沉淀wu的特性,zai加入mei标板之前,必需不ting搅拌。

保证充分的孵育时间和温度。

切勿shiyong不同生产批号的试剂取daixian有试剂huo混合xian有试剂。

zai混合huo溶解蛋bai溶液时,避mian泡mo产生。

zai实验开始之前,安paihao实验流程。

zai实验开始之前,清洁工作台。

若有问ti,应与wo公司huodai理商的技shu支持联系

巨噬细胞jiluo刺ji因zi(MCSF)试剂he结果舩ie吸/span>:

1. 每个标譲i返命/span>OD值jian去空bai孔的OD值后作图,ru设謒ei纯祝瑉e应取其平均值ji算。以标譲i返呐ǘ任猦eng坐标,OD值为纵坐标,绘出标准quxian。亦可以OD值为heng坐标,标譲i返呐ǘ任葑辏娉霰曜紂uxian。

2. tui荐shiyong专业的quxianzhi作软jian,rucurve expert 1.3huo1.4,zai软jian界面既可根据样品OD值,由标准quxiancha出相应的浓度,乘以稀释倍shu;亦可将样品的OD值dai入标准quxian的拟合fang程式,ji算出样品浓度,再乘以稀释倍shu,即为样品的实际浓度。

3. 若样品OD值高于标准quxian上限,应适当稀释后重ce,ji算浓度时应乘以稀释倍shu。 

巨噬细胞jiluo刺ji因zi(MCSF)试剂he有效qi稳ding性考察

本试验以巨噬细胞jiluo刺ji因zi(MCSF)为li

1.  OD值:

正常保存条jian下有效qi内和超过有效qi2个月所ceOD值比较

正常有效qi内OD值: 3.2512.8452.126, 1.859, 1.463, 1.022, 0.710, 0.08

超过2个月有效qiOD值:3.1.7, 2.643, 2.125, 1.796, 1.453, 0.876, 0.432, 0.07

2.hui收率:分bie于ding值血清及血浆中加入一ding量的巨噬细胞jiluo刺ji因zi(MCSF)标譲i罚馗碿eding并ji算其品均值,hui收率为ceding值与理论值的比率。

        正常保存条jian下有效qi内和过有效qi2个月elisa 试剂hehui收率检ce结果

Sample

Conditions

Recovery range(%)

Average(%)

Serum(n=6)

normal

88-106

95

After 12 month

80-100

87

EDTA plasma(n=6)

normal

88-106

97

After 12 month

78-98

87

3. xian性:分bie于ding值血清及血浆中加入一ding量的巨噬细胞jiluo刺ji因zi(MCSF)标譲i罚⒔瓯景滁span>1:2,1:4,1:8稀蕋ing瑇ian性范wei即为稀释后样本中巨噬细胞jiluo刺ji因zi(MCSF)含量的ceding值与理论值的比率。

         正常保存条jian下有效qi内和过有效qi2个月elisa 试剂hehuixian性检ce结果

Sample

Conditions

1:2

1:4

1:8

Serum(n=6)

normal

81-92%

85-90%

89-105%

After 12month

80-88%

82-87%

87-101%

EDTA plasma(n=6)

normal

93-104%

81-97%

91-96%

After 12month

82-95%

75-82%

74-90%

4.  精密度:以样品ceding值的变异系shuCV表示。CV%=SD/meanx100

批内差:取同一批次试剂he对di值,中值和高值样本进衳ie考靋e,每份样本ceding20次,分bieji算不同浓度样本的平均值和SD值。

批间差:选取 3 个不同批次的试剂he分bie对di、中、高值ding值样本进衳ie縞eding, 每个样本shiyong同一试剂he重复ceding 8 次,分bieji算不同浓度样本的平均值及 SD 值。(批内差: CV<10%;批间差: CV<11%)

       正常保存条jian下有效qi内和过有效qi2个月elisa 试剂hehui精密度检ce结果

                    Intra-assay precision

Conditions

normal

After 12month

normal

After 12month

normal

After 12month

sample

1

1

2

2

3

3

n

20

20

20

20

20

20

Mean(ng/ml)

16.68

14.22

70.25

62.36

369.75

327.88

SD

1.08

1.25

4.21

5.31

24.69

32.87

CV(%)

6.5

8.8

6.0

8.5

6.6

10

  

Conditions

normal

After 12month

normal

After 12month

normal

After 12month

Sample

1

1

2

2

3

3

n

20

20

20

20

20

20

Mean(ng/ml)

18.72

13.68

65.98

61.25

387.22

425.26

SD

1.45

1.52

4.83

5.18

28.49

36.87

CV%

7.7

11.1

7.3

8.5

7.3

8.7

巨噬细胞jiluo刺ji因zi(MCSF)试剂he会出xian的问ti及解jue办法:

1. 加入反应终止液后,没有吸光值huo吸光值偏di。

a.yuan因:未加入mei标记wu。

解jue办法:qing按照操作步骤进行。

b.yuan因:试剂he内容wu未能充分hui。

解jue办法:确ding试剂he内容wuhui温后再进行操作。

c.yuan因:室温taidi。

解jue办法:若室温taidi(<19),qing于操作步骤4,适当延长温育时间。

d.yuan因:未shiyong试剂he的清洗液清洗。

解jue办法: qingyong试剂he内所提供的清洗液清洗。

e.yuan因:试剂heyi过有效qi限。

解jue办法:qing更换cheng仍zai有效qi限内的试剂he。

2. 标准quxianxian性不jia,huo是平行性不hao。

a.yuan因:温育位置避光不haohuo受到气流干rao。

解jue办法: qing确ren温育位置既不透光也不透feng(ru抽屉内)

b.yuan因:操作时间拖tai久。

解jue办法:qingzaifang法熟练后再进行操作。

c.yuan因:微孔间相互污染。

解jue办法: 加样品时,qing小xin勿溅出微孔外,以mian造cheng其它微孔的污染。

d.yuan因:标譲i穐uomei标记wu所加入的量不一致。

解jue办法:qingshiyongyi校正过的移液枪,并确保其与吸头之间有高度密合性。

e.yuan因:tian加样品huo试剂的操作fang法不正确。

解jue办法:加样品huo试剂时,吸头qing勿jie触微孔。

f.yuan因:洗板过程fa生问ti(ru管路du塞、洗完板后未立刻进行下一步骤)

解jue办法:qingsui时监控洗板机洗板过程,洗完后立即进行下一步骤。

3. 吸光值均偏高(huoxian性不gou陡)

a.yuan因:室温tai高(>25)

解jue办法: 若无法降di室内温度,qing适当缩短步骤4的温育时间。

b.yuan因:底wu溶液受到污染。

解jue办法: 若faxian底wu溶液yi呈xian淡lan色,qing不要再shiyong。

c.yuan因:反应时间超过tai久。

解jue办法:qing控zhi反应时间。

d.yuan因ao副昙莣u污染了he内其它试剂。

解jue办法:shiyong过的吸头应立即丢qi,可避mian试剂间相互污染,凡是试剂(特bie蕅iao副昙莣u与底wu溶液)jie触过的容qi应立即清洗干净。(先以漂bai水浸泡,再以清水chong洗干净,可确保无残留)

4. 阴性标譲i返奈庵礵i于阳性标譲i返奈庵怠Ⅻ/span>

a.yuan因:微孔中的试剂未能充分混合。

解jue办法: 试剂加完后,需轻qiao盘四周shi其充分混合均匀。

b.yuan因:洗板过程fa生问ti(2-f.)

解jue办法:qing参考2-f.

c.yuan因:tian加样品huomei标记wu的量不一致。

解jue办法: qing参考2-d.

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