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人封闭蛋bai5(CLDN5)试剂盒

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大发888zhen人app名称: 人封闭蛋bai5(CLDN5)试剂盒
大发888zhen人app型号: CLDN5
大发888zhen人app展商: ELISA试剂盒
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简单介绍

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人封闭蛋bai5(CLDN5)试剂盒  的详蟜u樯埸/font>


人封闭蛋bai5(CLDN5)试剂盒

使用说ming书

人封闭蛋bai5(CLDN5)试剂盒基benyuan理:

ben试剂盒采用双大发888zhen人平tai紉ing腅LISA法。用抗人CLDN5大发888zhen人平tai包bei于酶标板上,实验shiyang品或标准品zhong的人CLDN5与包bei大发888zhen人平tai结合,游离的cheng分bei洗去。依次加入生物素hua的抗人CLDN5大发888zhen人平taihe辣genguoyanghua物酶标记的亲he素。抗人CLDN5大发888zhen人平tai与结合在包bei大发888zhen人平tai上的人CLDN5结合、生物素与亲he素特异xing结合而形cheng**复合物,游离的cheng分bei洗去。加入显色底物(TMB),TMB在辣genguoyanghua物酶的cuihua下呈现蓝色,加终止液后bianchenghuang色。用酶标yi在450nm波长处测OD值,人CLDN5浓du与OD450值之间呈正比,通guohui制标准曲线计算出yang品zhong人CLDN5的浓du。

人封闭蛋bai5(CLDN5)试剂盒描述:

英文名称 Human CLDN5 (Claudin 5) ELISA Kit
zhong文名称 人封闭蛋bai5(CLDN5)酶联**吸fu测定试剂盒
货号 X-EL-H1630c 种属 Human/人
gui格 96T/Kit (8*12 strips) 48T/Kit (8*6 strips)
检测fang法 双大发888zhen人平tai紉ing姆?/span>
检测范围 0.156~10ng/mL 灵mindu 0.094ng/mL

试剂盒zucheng:

zhong文名称

英文名称

gui格

保存

  ELISA酶标板(ke拆xie)

  Micro ELISA  Plate(Dismountable)

  8×12 / 8×6*

4/-20 #

冻干标准品

Reference Standard

  2/1 *

4/-20 #

标准品&yang品稀shi液

Reference Standard & Sample Diluent

  1 20mL/12mL*

4

浓缩生物素hua大发888zhen人平tai

Concentrated Biotinylated Detection Ab

  1 120μL/70μL*

4/-20 #

生物素hua大发888zhen人平tai稀shi液

Biotinytated Detection Ab Diluent

  1 10mL/6mL*

4

浓缩HRP胒u岷衔铧/span>

Concentrated HRP Conjugate

  1 120μL/70μL*

4(bi光)

胒u岷衔锵hi液

HRP Conjugate Diluent

  1 10mL/6mL*

4

浓缩洗涤液(25×

ConcentratedWashBuffer (25×)

  1 30mL/16mL*

4

底物溶液(TMB

Substrate Reagent

  1 10mL/6mL*

4(bi光)

fan应终止液

Stop Solution

  1 10mL/6mL*

4

封板覆mo

Plate Sealer

  5/3 zhang*

 

大发888zhen人app说ming书

Product  Description

  1 

 

质检报gao

Certificate of Analysis

  1 

 

特别说ming
*: [96T/48T](打开包zhuang后请及shi检查suo有物品是否齐全完整)
#: 
一zhou内使用ke存于4℃,需长shi间存fang或多次使用建yi存于-20.                                      

人封闭蛋bai5(CLDN5)试剂盒检测莃ai急竒ong作:

1. 请提前20分zhongcong冰xiangzhong取出试剂盒,平衡zhi室wen。

2. 将浓缩洗涤液用双蒸shui稀shi(1:25)。蝐ong猛甑膄ang回4℃。cong冰xiangzhong取出的浓缩洗涤液ke能有结jing,属于正常现象,ke用40℃shui浴wei加热使结jing完全溶解后再配制洗涤液(加热wendu瞙ui琯uo50℃,使用shi洗涤液应为室wen)。当ri使用。

3. 标准品10000×g离心1分zhong,加入标准品&yang品稀shi液1.0mLzhi冻干标准品zhong,旋紧管盖,jing置10分zhong,上下dian倒数次,待qi充分溶解后,用移液qi将qi轻轻混匀(浓du为8000pg/mL)。ran后gen据需要进xing倍比稀shi(zhu:瞙ui苯釉趂an应kongzhong进xing倍比稀shi)。建yi配制chengyi下浓du:按照稀shifang法图li 标准品&yang品稀shi液直接作为空baikong0ng/mL。如配制5ng/mL标准品:取0.5mL10ng/mL的上述标准品加入含有0.5mL标准品&yang品稀shi液的EP管zhong,混匀即ke,qi余浓du依ci类推。 

4. 生物素hua大发888zhen人平taigong作液:实验前计算当次实验suo需用量(yi100μL/kong计),实际配制shi应多配制100-200μL。使用前15分zhong,yi生物素hua大发888zhen人平tai稀shi液稀shi浓缩生物素hua大发888zhen人平tai(1:100)chenggong作浓du。当ri使用。

5. 胒u岷衔飃ong作液:实验前计算当次实验suo需用量(yi100μL/kong计),实际配制shi应多配制100-200μL。使用前15分zhong,yi胒u岷衔锵hi液稀shi浓缩HRP胒u岷衔铧/span>(1:100)chenggong作浓du。

当ri使用。

人封闭蛋bai5(CLDN5)试剂盒标准品稀shifang法图li:(yi500μL/管为li,yekegen据实际用量来稀shi,如200μL/管)

            

1. 在各kongzhong加入标准品或yang品各100μL 37℃孵育90分zhong

2. 加入100μ生物素hua大发888zhen人平taigong作液,37℃孵育60分zhong

3. 洗涤3

4. 加入100μL胒u岷衔飃ong作液, 37℃孵育30分zhong

5. 洗涤5

6. 加入90μL底物溶液, 37℃孵育15分zhong左右

7. 加入50μL终止液,li即在450nm波长处测量OD

8. 结guo计算

一、操作因素对ELISA结guo的影响ELISA操作步骤复杂,操作不当将引起较大的误差。yi下叙述各ge步骤zhong的影响因素。

1.加yang

2.wen育

3.洗涤

4.显色

5.比色

二、huiqu的设置通常qing况下,ELISA定xing实验yi“阳xing”he“阴xing”来报gao结guo,两者间有一tiao分界线bei称为“阳xing舩ie现怠保?/span>cut-off valueCO值),zhe是定xing**测定结guo报gao的依据。

三、标ben复查ELISA手gong检测guo程复杂,影响因素较多,即使室内质kong在kong,yeke能因kong间差异而造cheng结guo的差异,因ci加大复查力du是保证结guo准确xing的kekaofang法,比如对HBsAgHBeAgHCV-AbHIV-AbTP-Abdeng项目的ke疑、ruo阳xing标ben及少jianmo式的检测结guo进xing复查。

四、结guo舩ie蟞e报gao常用下列几种fang法表示结guo:

1.定xing测定

2.半定量测定 结guo一般yi滴du表示。

3.定量测定 糲ong靡阎康谋曜计纷饕幌盗邢hi后进xingELISA测定,hui制标准曲线,结guoyiyou良量或单位表示。在ELISA定量检测zhong每一块fan应板都必xuhui制相应的标准曲线。

zhu意事项:

仔细阅读说ming书。

检查试剂盒标签上的觴ing凇H鏶uo超guo觴ing冢胛鹗褂谩Ⅻ/span>

癱i祄ing书确定suo有试剂齐全(数量、体积)。

标ben制备要gui范,每份标ben体积要按2-3ge复kongyi上的量制备(贮存),尽量分zhuangzuo备份。duan期内wu法实验者,zhu意低wen保存。

准备好suo有实验额外suo需物品,(比如移液qi,试管,清洗qi,酶标yi)。

癱i祄ing书将suo用试剂平衡zhi室wen,gen据检测标ben数量确定suo需试剂的量。

检查试剂盒内每种试剂的贮存tiaojian,保证suo有试剂均按照试剂盒内说ming书推荐的tiaojian存储。

检查不稳定或者bian质的试剂溶液(比如沉淀或bian色)。觴ing┦约粒热绫曜计废hi液或者检测稀shi液,ke能在设计shi就含有沉淀物。suo有试剂在滴入酶标板之前,必需充分混匀。而由于沉淀物的特xing,在加入酶标板之前,必需不停搅ban。

保证充分的孵育shi间hewendu。

切勿使用不同生产pi号的试剂取代蟴hong惺约粱蚧旌舷zhong惺约痢Ⅻ/span>

在混合或溶解蛋bai溶液shi,bi免泡沫产生。

在实验开始之前,安pai好实验流程。

在实验开始之前,清洁gong作tai。

ruo有问题,应与我公司或代理商的技术支硓hi袋/span>

人封闭蛋bai5(CLDN5)试剂盒结guo舩ie吸/span>:

1. 每ge标准品的OD值减去空baikong的OD值后作图,如设置复kong,则应取qi平均值计算。yi标准品的浓du为横坐标,OD值为纵坐标,hui出标准曲线。yikeyiOD值为横坐标,标准品的浓du为纵坐标,hui出标准曲线。

2. 推荐使用专业的曲线制作软jian,如curve expert 1.31.4,在软jian界面既kegen据yang品OD值,由标准曲线查出相应的浓du,乘yi稀shi倍数;yike将yang品的OD值代入标准曲线的拟合fang程式,计算出yang苀ang╠u,再乘yi稀shi倍数,即为yang品的实际浓du。

3. ruoyang品OD值高于标准曲线上限,应适当稀shi后重测,计算浓dushi应乘yi稀shi倍数。 

封闭蛋bai5(CLDN5)试剂盒觴ing谖榷▁ing考察

ben试验yi封闭蛋bai5(CLDN5)为li

1.        OD值:

正常保存tiaojian下觴ing谀趆e超guo觴ing冱/span>2ge月suo测OD值比较

正常觴ing谀冱/span>OD值: 3.2512.8452.126, 1.859, 1.463, 1.022, 0.710, 0.08

超guo2ge月觴ing冱/span>OD值:3.1.7, 2.643, 2.125, 1.796, 1.453, 0.876, 0.432, 0.07

2.回收率:分别于定值血清及血浆zhong加入一定量的封闭蛋bai5(CLDN5)标准品,重复测定并计算qi品均值,回收率为测定值与理论值的比率。

        正常保存tiaojian下觴ing谀趆eguo觴ing冱/span>2ge月elisa 试剂盒回收率检测结guo

Sample

Conditions

Recovery range(%)

Average(%)

Serum(n=6)

normal

88-106

95

After 12 month

80-100

87

EDTA plasma(n=6)

normal

88-106

97

After 12 month

78-98

87

 

3.       线xing:分别于定值血清及血浆zhong加入一定量的封闭蛋bai5(CLDN5)标准品,并将标ben按1:2,1:4,1:8稀shi,线xing范围即为稀shi后yangbenzhong封闭蛋bai5(CLDN5)含量的测定值与理论值的比率。

         正常保存tiaojian下觴ing谀趆eguo觴ing冱/span>2ge月elisa 试剂盒回线xing检测结guo

Sample

Conditions

1:2

1:4

1:8

Serum(n=6)

normal

81-92%

85-90%

89-105%

After 12month

80-88%

82-87%

87-101%

EDTA plasma(n=6)

normal

93-104%

81-97%

91-96%

After 12month

82-95%

75-82%

74-90%

 

4.        精密du:yiyang品测定值的bian异系数CV表示。CV%=SD/meanx100

pi内差:取同一pi次试剂簒ie缘椭担瑉hong值he高值yangben进xing定量检测,每份yang眏ing舛?/span>20次,分别计算不同浓duyangben的平均值heSD值。

pi间差:选取 3 ge不同pi次的试剂盒分别对低、zhong、高值定值yangben进xing定量测定, 每geyangben使用同一试剂盒重复测定 8 次,分别计算不同浓duyangben的平均值及 SD 值。(pi内差: CV<10%;pi间差: CV<11%)

       正常保存tiaojian下觴ing谀趆eguo觴ing冱/span>2ge月elisa 试剂盒回精密du检测结guo

                    Intra-assay precision

Conditions

normal

After 12month

normal

After 12month

normal

After 12month

sample

1

1

2

2

3

3

n

20

20

20

20

20

20

Mean(ng/ml)

16.68

14.22

70.25

62.36

369.75

327.88

SD

1.08

1.25

4.21

5.31

24.69

32.87

CV(%)

6.5

8.8

6.0

8.5

6.6

10

 

Conditions

normal

After 12month

normal

After 12month

normal

After 12month

Sample

1

1

2

2

3

3

n

20

20

20

20

20

20

Mean(ng/ml)

18.72

13.68

65.98

61.25

387.22

425.26

SD

1.45

1.52

4.83

5.18

28.49

36.87

CV%

7.7

11.1

7.3

8.5

7.3

8.7

人封闭蛋bai5(CLDN5)试剂盒会出现的问题及解jue办法:

1. 加入fan应终止液后,没有吸光值或吸光值偏低。

a.yuan因:wei加入酶标记物。

解jue办法:请按照操作步骤进xing。

b.yuan因:试剂盒内容物wei能充分回。

解jue办法:确定试剂盒内容物回wen后再进xing操作。

c.yuan因:室wen太低。

解jue办法:ruo室wen太低(<19),请于操作步骤4,适当延长wen育shi间。

d.yuan因:wei使用试剂盒的清洗液清洗。

解jue办法: 请用试剂盒内suo提供的清洗液清洗。

e.yuan因:试剂盒已guo觴ing谙蕖Ⅻ/span>

解jue办法:请更换cheng仍在觴ing谙弈诘氖约梁小Ⅻ/span>

2. 标准曲线线xing不佳,或是平xingxing不好。

a.yuan因:wen育位置bi光不好或受到气流干扰。

解jue办法: 请确认wen育位置既不透光ye不透风(如抽屉内)

b.yuan因:操作shi间tuo太久。

解jue办法:请在fang法熟练后再进xing操作。

c.yuan因:weikong间相互污染。

解jue办法: 加yang品shi,请小心勿溅出weikong外,yi免造chengqi它weikong的污染。

d.yuan因:标准品或酶标记物suo加入的量瞙ui恢隆Ⅻ/span>

解jue办法:请使用已校正guo的移液枪,并确保qi与吸tou之间有高du密合xing。

e.yuan因:添加yang品或试剂的操作fang法不正确。

解jue办法:加yang品或试剂shi,吸tou请勿接chuweikong。

f.yuan因:洗板guo程发生问题(如管路du塞、洗完板后weilike进xing下一步骤)

解jue办法:请随shi监kong洗板机洗板guo程,洗完后li即进xing下一步骤。

3. 吸光值均偏高(或线xing不够dou)

a.yuan因:室wen太高(>25)

解jue办法: ruowu法降低室内wendu,请适当缩duan步骤4的wen育shi间。

b.yuan因:底物溶液受到污染。

解jue办法: ruo发现底物溶液已呈现淡蓝色,请瞙ui偈褂谩Ⅻ/span>

c.yuan因:fan应shi间超guo太久。

解jue办法:请kong制fan应shi间。

d.yuan因:酶标记物污染了盒内qi它试剂。

解jue办法:使用guo的吸tou应li即丢弃,kebi免试剂间相互污染,凡是试剂(特别是酶标记物与底物溶液)接chuguo的容qi应li即清洗干净。(先yi漂baishui浸泡,再yi清shui冲洗干净,ke确保wucanliu)

4. 阴xing标准品的吸光值低于阳xing标准品的吸光值。

a.yuan因:weikongzhong的试剂wei能充分混合。

解jue办法: 试剂加完后,需轻敲盘四zhou使qi充分混合均匀。

b.yuan因:洗板guo程发生问题(2-f.)

解jue办法:请参考2-f.

c.yuan因:添加yang品或酶标记物的量瞙ui恢隆Ⅻ/span>

解jue办法: 请参考2-d.

 

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