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renα1酸性糖蛋白(α1-AGP)试剂盒

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da发888真renapp名称: renα1酸性糖蛋白(α1-AGP)试剂盒
da发888真renappxing号: α1-AGP
da发888真renapp展商: ELISA试剂盒
da发888真renapp文档: 无相guan文档

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renα1酸性糖蛋白(α1-AGP)试剂盒  的详细介绍


renα1酸性糖蛋白(α1-AGP)试剂盒

使用说明书

renα1酸性糖蛋白(α1-AGP)试剂盒基本原li:

本试剂盒采用双da发888真ren平台夹xinELISA法。用抗renα1-AGPda发888真ren平台包被于酶标banshang,实验shi样品或标准品zhong的renα1-AGPyu包被da发888真ren平台结he,游li的成分被xi去。yi次加入生物素hua的抗renα1-AGPda发888真ren平台hela根过yanghua物酶标记的qinhe素。抗renα1-AGPda发888真ren平台yu结簒ian诎籨a发888真ren平台shang的renα1-AGP结he、生物素yuqinhe素特异性结he而形成**复he物,游li的成分被xi去。加入xian色底物(TMB),TMBzaila根过yanghua物酶的催hua下呈现蓝色,加zhong止ye后变成黄色。用酶标yizai450nm波changchu测OD值,renα1-AGP浓度yuOD450值之间呈正比,通过huizhi标准曲线计算出样品zhongrenα1-AGP的浓度。

renα1酸性糖蛋白(α1-AGP)试剂盒描述:

ying文名称 Human α1-AGP (Alpha-1-Acid Glycoprotein) ELISA Kit
zhong文名称 renα1酸性糖蛋白(α1-AGP)酶lian**xi附测定试剂盒
货号 X-EL-H0001c zhong属 Human/ren
规格 96T/Kit (8*12 strips) 48T/Kit (8*6 strips)
检测方法 双da发888真ren平台夹xin法
检测范围 3.125~200ng/mL lingmin度 1.875ng/mL

试剂盒zu成:

zhong文名称

ying文名称

规格

保存

  ELISA酶标ban(可chai卸)

  Micro ELISA  Plate(Dismountable)

  8×12 / 8×6*

4/-20 #

冻干标准品

Reference Standard

  2/1 zhi*

4/-20 #

标准品&样品xi释ye

Reference Standard & Sample Diluent

  1 20mL/12mL*

4

浓缩生物素huada发888真ren平台

Concentrated Biotinylated Detection Ab

  1zhi 120μL/70μL*

4/-20 #

生物素huada发888真ren平台xi释ye

Biotinytated Detection Ab Diluent

  1 10mL/6mL*

4

浓缩HRP酶结he物

Concentrated HRP Conjugate

  1zhi 120μL/70μL*

4(避光)

酶结he物xi释ye

HRP Conjugate Diluent

  1 10mL/6mL*

4

浓缩xi涤ye(25×

ConcentratedWashBuffer (25×)

  1 30mL/16mL*

4

底物溶ye(TMB

Substrate Reagent

  1 10mL/6mL*

4(避光)

反应zhong止ye

Stop Solution

  1 10mL/6mL*

4

fengban覆膜

Plate Sealer

  5/3 *

 

da发888真renapp说明书

Product  Description

  1 

 

质检报告

Certificate of Analysis

  1 

 

特别说明
*: [96T/48T](打kai包装后请及shi检cha所有物品是否齐全完整)
#: 
一周内使用可存于4℃,需changshi间存放或多次使用建yi存于-20.                                      

renα1酸性糖蛋白(α1-AGP)试剂盒检测前准备工作:

1. 请提前20穤hong哟觔ing箱zhong取出试剂盒,平衡至室蝜ongⅫ/span>

2. 将浓缩xi涤ye用双蒸水xi释(1:25)。未用完的放hui4℃。从bing箱zhong取出的浓缩xi涤ye可neng有结晶,属于正常现xiang,可用40℃水浴微加热使结晶完全溶解后再配zhixi涤ye(加热温度bu要超过50℃,使用shixi涤ye应为室温)。当日使用。

3. 标准品10000×glixin1穤hong樱尤氡曜计饵/span>&样品xi释ye1.0mL至冻干标准品zhong,xuan紧管盖,静置10穤hong樱瑂hang下颠dao数次,待其充分溶解后,用移ye器将其轻轻混匀(浓度为8000pg/mL)。然后根据需要进xingbei眗en∈停▃hu:bu要直jiezai反应孔zhong进xingbei眗en∈停=▂i配zhi成以下浓度:按zhaoxi蕋ou椒ㄍ祭?/span> 标准品&样品xi释ye直jie作为空白孔0ng/mL。如配zhi5ng/mL标准品:取0.5mL10ng/mL的shang述标准品加入含有0.5mL标准品&样品xi释ye的EP管zhong,混匀即可,其余浓度yi此类推。 

4. 生物素huada发888真ren平台工作ye:实验前计算当次实验所需用量(以100μL/孔计),实际配zhishi应多配zhi100-200μL。使用前15穤hong樱陨锼豩uada发888真ren平台xi释襤e∈团ㄋ跎锼豩uada发888真ren平台(1:100)成工作浓度。当日使用。

5. 酶结he物工作ye:实验前计算当次实验所需用量(以100μL/孔计),实际配zhishi应多配zhi100-200μL。使用前15穤hong樱悦附醜e物xi释襤e∈团ㄋ酎/span>HRP酶结he物(1:100)成工作浓度。

当日使用。

renα1酸性糖蛋白(α1-AGP)试剂盒标准品xi蕋ou椒ㄍ祭海ㄒ狱/span>500μL/管为例,ye可根据实际用量来xi释,如200μL/管)

            

1. zai各孔zhong加入标准品或样品各100μL 37℃孵育90穤hong尹/span>

2. 加入100μ生物素huada发888真ren平台工作ye,37℃孵育60穤hong尹/span>

3. xi涤3

4. 加入100μL酶结he物工作ye, 37℃孵育30穤hong尹/span>

5. xi涤5

6. 加入90μL底物溶ye, 37℃孵育15穤hong幼笥腰/span>

7. 加入50μLzhong止ye,立即zai450nm波changchu测量OD

8. 结果计算

一、操作yin素对ELISA结果的yingxiangELISA操作步zhou复杂,操作bu当将yin起jiaoda的误差。以下叙述各ge步zhouzhong的yingxiangyin素。

1.加样

2.温育

3.xi涤

4.xian色

5.比色

二、粂i纳柚猛ǔG榭鱿拢?/span>ELISA定性实验以“阳性”he“阴性”来报告结果,两者间有一条分界线被称为“阳性pan断值”(cut-off valueCO值),zhe是定性**测定结果报告的yi据。

三、标本复chaELISA手工检测过程复杂,yingxiangyin素jiao多,即使室内质kongzaikong,ye可nengyin孔间差异而zao成结果的差异,yin此加da复cha力度是保zheng结果譲i沸缘目煽糠椒ǎ热缍狱/span>HBsAgHBeAgHCV-AbHIV-AbTP-Ab祌en钅康目梢伞⑷跹粜员瓯炯吧偌鹠o式的检测结果进xing复cha。

四、结果pan断he报告常用下列几zhong方法表示结果:

1.定性测定

2.半定量测定 结果一般以滴度表示。

3.定量测定 即用已知量的标准品作一系列xi释后进xingELISA测定,huizhi标准曲线,结果以优良量或单位表示。zaiELISA定量检测zhong每一块反应ban都必须huizhi相应的标准曲线。

zhu意shi项:

仔细阅秎iao得魇椤Ⅻ/span>

检cha试剂盒标qianshang的有xiao期。如果超过有xiao期,请勿使用。

按说明书确定所有试剂齐全(数量、体积)。

标本zhi备要规范,每份标本体积要按2-3ge复孔以shang的量zhi备(贮存),尽量分装做备份。短期内无法实验者,zhu意di温保存。

准备好所有实验额外所需物品,(比如移ye器,试管,清xi器,酶标yi)。

按说明书将所用试剂平衡至室温,根据检测标本数量确定所需试剂的量。

检cha试剂簒in诿縵hong试剂的贮存条件,保zheng所有试剂均按zhao试剂簒in谒得魇橥萍龅奶跫娲ⅰⅫ/span>

检chabu稳定或者变质的试剂溶ye(比如沉淀或变色)。觴ing┦约粒热绫曜计穢i释ye或者检测xi释ye,可nengzai设计shi就含有沉淀物。所有试剂zai滴入酶标ban之前,必需充分混匀。而由于沉淀物的特性,zai加入酶标ban之前,必需bu停搅拌。

保zheng充分的孵育shi间he温度。

切勿使用bu同生产pi号的试剂取代现有试剂或混he现有试剂。

zai混he或溶解蛋白溶yeshi,避免泡沫产生。

zai实验kai始之前,安排好实验流程。

zai实验kai始之前,清洁工作台。

若有问ti,应yu我公司或代li商的ji术zhichilian系

renα1酸性糖蛋白(α1-AGP)试剂盒结果pan断:

1. 每ge标准品的OD值减去空白孔的OD值后作图,如设置复孔,则应取其平均值计算。以标准品的浓度为横zuo标,OD值为纵zuo标,hui出标准曲线。亦可以OD值为横zuo标,标准品的浓度为纵zuo标,hui出标准曲线。

2. 推荐使用zhuan业的曲线zhi作软件,如curve expert 1.31.4,zai软件界面ji可根据样品OD值,由标准曲线cha出相应的浓度,乘以xi释bei数;亦可将样品的OD值代入标准曲线的拟he方程式,计算出样品浓度,再乘以xi释bei数,即为样品的实际浓度。

3. 若样品OD值高于标准曲线shang限,应适当xi释后zhong测,计算浓度shi应乘以xi释bei数。 

renα1酸性糖蛋白(α1-AGP)试剂盒有xiao期稳定性考察

本试验以α1酸性糖蛋白(α1-AGP)为例

1.        OD值:

正常保存条件下有xiao期内he超过有xiao期2ge月所测OD值比jiao

正常有xiao期内OD值: 3.2512.8452.126, 1.859, 1.463, 1.022, 0.710, 0.08

超过2ge月有xiao期OD值:3.1.7, 2.643, 2.125, 1.796, 1.453, 0.876, 0.432, 0.07

2.hui收率:分别于定值xue清及xue浆zhong加入一定量的α1酸性糖蛋白(α1-AGP)标准品,zhong复测定并计算其品均值,hui收率为测定值yuli论值的比率。

        正常保存条件下有xiao期内he过有xiao期2ge月elisa 试剂盒hui收率检测结果

Sample

Conditions

Recovery range(%)

Average(%)

Serum(n=6)

normal

88-106

95

After 12 month

80-100

87

EDTA plasma(n=6)

normal

88-106

97

After 12 month

78-98

87

 

3.       线性:分别于定值xue清及xue浆zhong加入一定量的α1酸性糖蛋白(α1-AGP)标准品,并将标本按1:2,1:4,1:8xi释,线性范围即为xi释后样本zhongα1酸性糖蛋白(α1-AGP)含量的测定值yuli论值的比率。

         正常保存条件下有xiao期内he过有xiao期2ge月elisa 试剂盒hui线性检测结果

Sample

Conditions

1:2

1:4

1:8

Serum(n=6)

normal

81-92%

85-90%

89-105%

After 12month

80-88%

82-87%

87-101%

EDTA plasma(n=6)

normal

93-104%

81-97%

91-96%

After 12month

82-95%

75-82%

74-90%

 

4.        精密度:以样苀an舛ㄖ档谋湟煜凳?/span>CV表示。CV%=SD/meanx100

pi内差:取同一pi次试剂盒对di值,zhong值he高值样本进xing定量检测,每份样本测定20次,分别计算bu同浓度样本的平均值heSD值。

pi间差:选取 3 gebu同pi次的试剂盒分别对di、zhong、高值定值样本进xing定量测定, 每ge样本使用同一试剂盒zhong复测定 8 次,分别计算bu同浓度样本的平均值及 SD 值。(pi内差: CV<10%;pi间差: CV<11%)

       正常保存条件下有xiao期内he过有xiao期2ge月elisa 试剂盒hui精密度检测结果

                    Intra-assay precision

Conditions

normal

After 12month

normal

After 12month

normal

After 12month

sample

1

1

2

2

3

3

n

20

20

20

20

20

20

Mean(ng/ml)

16.68

14.22

70.25

62.36

369.75

327.88

SD

1.08

1.25

4.21

5.31

24.69

32.87

CV(%)

6.5

8.8

6.0

8.5

6.6

10

 

Conditions

normal

After 12month

normal

After 12month

normal

After 12month

Sample

1

1

2

2

3

3

n

20

20

20

20

20

20

Mean(ng/ml)

18.72

13.68

65.98

61.25

387.22

425.26

SD

1.45

1.52

4.83

5.18

28.49

36.87

CV%

7.7

11.1

7.3

8.5

7.3

8.7

renα1酸性糖蛋白(α1-AGP)试剂盒会出现的问ti及解jue办法:

1. 加入反应zhong止ye后,mei有xi光值或xi光值偏di。

a.原yin:未加入酶标记物。

解jue办法:请按zhao操作步zhou进xing。

b.原yin:试剂簒in谌菸镂磏eng充分hui。

解jue办法:确定试剂簒in谌菸飄ui温后再进xing操作。

c.原yin:室温taidi。

解jue办法:若室温taidi(<19),请于操作步zhou4,适当延chang温育shi间。

d.原yin:未使用试剂盒的清xiye清xi。

解jue办法: 请用试剂簒in谒峁┑那鍃iye清xi。

e.原yin:试剂盒已过有xiao期限。

解jue办法:请更换成仍zai有xiao期限内的试剂盒。

2. 标准曲线线性bu佳,或是平xing性bu好。

a.原yin:温育位置避光bu簃ei蚴躣ao气流干扰。

解jue办法: 请确ren温育位置jibu透光yebu透风(如抽屉内)

b.原yin:操作shi间tuotai久。

解jue办法:请zai方法熟练后再进xing操作。

c.原yin:微孔间相hu污ran。

解jue办法: 加样品shi,请小xin勿溅出微孔外,以免zao成其它微孔的污ran。

d.原yin:标准品或酶标记物所加入的量bu一謑ongⅫ/span>

解jue办法:请使用已校正过的移ye枪,并确保其yuxitou之间有高度密he性。

e.原yin:添加样品或试剂的操作方法bu正确。

解jue办法:加样品或试剂shi,xitou请勿jie触微孔。

f.原yine碽an过程发生问ti(如管路dusai、xi完ban后未立刻进xing下一步zhou)

解jue办法:请suishi监kongxiban机xiban过程,xi完后立即进xing下一步zhou。

3. xi光值均偏高(或线性bu够陡)

a.原yin:室温tai高(>25)

解jue办法: 若无法降di室内温度,请适当缩短步zhou4的温育shi间。

b.原yin:底物溶ye受dao污ran。

解jue办法: 若发现底物溶ye已呈现淡蓝色,请bu要再使用。

c.原yin:反应shi间超过tai久。

解jue办法:请kongzhi反应shi间。

d.原yin:酶标记物污ranliao簒in谄渌约痢Ⅻ/span>

解jue办法:使用过的xitou应立即丢qi,可避免试剂间相hu污ran,fan是试剂(特别是酶标记物yu底物溶ye)jie触过的容器应立即清xi干净。(先以漂白水浸泡,再以清水冲xi干净,可确保无残liu)

4. 阴性标准品的xi光值di于阳性标准品的xi光值。

a.原yin:微孔zhong的试剂未neng充分混he。

解jue办法: 试剂加完后,需轻敲盘四周使其充分混he均匀。

b.原yine碽an过程发生问ti(2-f.)

解jue办法:请参考2-f.

c.原yin:添加样品或酶标记物的量bu一謑ongⅫ/span>

解jue办法: 请参考2-d.

 

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