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人半胱氨酸蛋白酶抑制剂(CSTA)shi剂盒

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大fa888真人app名称: 人半胱氨酸蛋白酶抑制剂(CSTA)shi剂盒
大fa888真人app型hao: CSTA
大fa888真人app展商: ELISAshi剂盒
大fa888真人app文档: 无xiang关文档

简单介绍

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人半胱氨酸蛋白酶抑制剂(CSTA)shi剂盒  的详细介绍


人半胱氨酸蛋白酶抑制剂(CSTA)shi剂盒

shi用说明shu

人半胱氨酸蛋白酶抑制剂(CSTA)shi剂盒基本原理:

本shi剂盒采用shuang大fa888真人平台jia心ELISAfa。用抗人CSTA大fa888真人平台包被于酶标板shang,实yanshi样品huo标zhun苀en械娜薈STAyu包被大fa888真人平台jie合,you离的成fen被洗去。依次加入生物suhua的抗人CSTA大fa888真人平台和纀ei齳anghua物酶标记的亲和su。抗人CSTA大fa888真人平台yujie合在包被大fa888真人平台shang的人CSTAjie簒i⑸飐uyu亲和su特异性jie合而形成**复合物,you离的成fen被洗去。加入显色底物(TMB),TMB在纀ei齳anghua物酶的催hua下呈现蓝色,加终止液后变成黄色。用酶标仪在450nm波长处ceOD值,人CSTAnongduyuOD450值之间呈正比,通过绘制标zhun曲线计suan出样苀en腥薈STA的nongdu。

人半胱氨酸蛋白酶抑制剂(CSTA)shi剂盒描shu:

英文名称 Human CSTA (Cystatin A)  ELISA Kit
zhong文名称 人半胱氨酸蛋白酶抑制剂(CSTA)酶lian**吸附ce定shi剂盒
货hao X-EL-H0147c 种属 Human/人
gui格 96T/Kit (8*12 strips) 48T/Kit (8*6 strips)
jiancefangfa shuang大fa888真人平台jia心fa
jiance范围 0.313~20ng/mL 灵敏du 0.188ng/mL

shi剂盒组成:

zhong文名称

英文名称

gui格

保存

  ELISA酶标板(可chai卸)

  Micro ELISA  Plate(Dismountable)

  8×12 / 8×6*

4/-20 #

冻gan标zhun品

Reference Standard

  2/1 *

4/-20 #

标zhun品&样品xi释液

Reference Standard & Sample Diluent

  1 20mL/12mL*

4

nong缩生物suhua大fa888真人平台

Concentrated Biotinylated Detection Ab

  1 120μL/70μL*

4/-20 #

生物suhua大fa888真人平台xi释液

Biotinytated Detection Ab Diluent

  1 10mL/6mL*

4

nong缩HRP酶jie合物

Concentrated HRP Conjugate

  1 120μL/70μL*

4(bi光)

酶jie合物xi释液

HRP Conjugate Diluent

  1 10mL/6mL*

4

nong缩洗涤液(25×

ConcentratedWashBuffer (25×)

  1 30mL/16mL*

4

底物溶液(TMB

Substrate Reagent

  1 10mL/6mL*

4(bi光)

反应终止液

Stop Solution

  1 10mL/6mL*

4

封板覆mo

Plate Sealer

  5/3 zhang*

 

大fa888真人app说明shu

Product  Description

  1 

 

质jian报告

Certificate of Analysis

  1 

 

特别说明
*: [96T/48T](dakai包装后请及shijian查所you物品是否齐全完整)
#: 
一周内shi用可存于4℃,需长shi间存fanghuo多次shi用jian议存于-20.                                      

人半胱氨酸蛋白酶抑制剂(CSTA)shi剂盒jiance前zhunbei工作:

1. 请提前20fen钟从冰xiangzhong取出shi剂簒iao胶鈠hi室蝜ongⅫ/span>

2. jiangnong缩洗涤液用shuang蒸水xi释(1:25)。未用完的fang回4℃。从冰xiangzhong取出的nong缩洗涤液可nengyoujie晶,属于正常现象,可用40℃水浴wei加热shijie晶完全溶解后再配制洗涤液(加热温du不yaochao过50℃,shi用shi洗涤液应为室温)。当日shi用。

3. 标zhun品10000×g离心1fen钟,加入标zhun品&样品xi释液1.0mLzhi冻gan标zhun苀enxiao艄芨牵琷ingzhi10fen钟,shang下颠倒数次,待其充fen溶解后,用移液器jiang其轻轻混匀(nongdu为8000pg/mL)。ran后根据需yao进行倍比xi释(注:不yao直接在反应孔zhong进行倍比xi释)。jian议配制成yi下nongdu:an照xi释fangfa图li 标zhun品&样品xi释液直接作为空白孔0ng/mL。如配制5ng/mL标zhun品:取0.5mL10ng/mL的shangshu标zhun品加入含you0.5mL标zhun品&样品xi释液的EP管謝iao煸燃纯桑鋣unongdu依此类推。 

4. 生物suhua大fa888真人平台工作液:实yan前计suan当次实yan所需用量(yi100μL/縵hun疲导逝渲苨hi应多配制100-200μL。shi用前15fen钟,yi生物suhua大fa888真人平台xi释液xi释nong缩生物suhua大fa888真人平台(1:100)成工作nongdu。当日shi用。

5. 酶jie合物工作液:实yan前计suan当次实yan所需用量(yi100μL/縵hun疲导逝渲苨hi应多配制100-200μL。shi用前15fen钟,yi酶jie合物xi释液xi释nong缩HRP酶jie合物(1:100)成工作nongdu。

当日shi用。

人半胱氨酸蛋白酶抑制剂(CSTA)shi剂盒标zhun品xi释fangfa图li:(yi500μL/管为li,也可根据实际用量来xi释,如200μL/管)

            

1. 在各孔zhong加入标zhun品huo样品各100μL 37℃孵育90fen钟

2. 加入100μ生物suhua大fa888真人平台工作液,37℃孵育60fen钟

3. 洗涤3

4. 加入100μL酶jie合物工作液, 37℃孵育30fen钟

5. 洗涤5

6. 加入90μL底物溶液, 37℃孵育15fen钟左右

7. 加入50μL终止液,立即在450nm波长处ce量OD

8. jie果计suan

一、cao作因su对ELISAjie果的ying响ELISAcao作步骤复杂,cao作不当jiang引起较大的wu差。yi下叙shu各个步骤zhong的ying响因su。

1.加样

2.温育

3.洗涤

4.显色

5.比色

二、灰区的设zhi通常情kuang下,ELISA定性实yanyi“阳性”和“阴性”来报告jie果,两者间you一tiaofen界线被称为“阳性判断值”(cut-off valueCO值),zhe是定性**ce定jie果报告的依据。

三、标本复查ELISA手工jiance过程复杂,ying响因su较多,即shi室内质控在控,也可neng因縵hun洳钜於斐蒵ie果的差异,因此加大复查力du是保证jie果譲i沸缘目蒶aofangfa,比如对HBsAgHBeAgHCV-AbHIV-AbTP-Abdeng项目的可疑、弱阳性标本及shao见模蔶iang膉iancejie果进行复查。

四、jie果判断和报告常用下列ji种fangfa表shijie果:

1.定性ce定

2.半定量ce定 jie果一般yi滴du表shi。

3.定量ce定 即用已知量的标zhun品作一系列xi释后进行ELISAce定,绘制标zhun曲线,jie果yi优良量huo单位表shi。在ELISA定量jiancezhong每一kuai反应板都必须绘制xiang应的标zhun曲线。

注yishi项:

仔细阅读说明shu。

jian查shi剂盒标签shang的you效期。如果chao过you效期,请勿shi用。

an说明shuque定所youshi剂齐全(数量、体ji)。

标本制beiyaogui范,每份标本体jiyaoan2-3个复孔yishang的量制bei(贮存),尽量fen装做bei份。短期内无fa实yan者,注yi低温保存。

zhunbeihao所you实yan额外所需物品,(比如移液器,shi管,qing洗器,酶标仪)。

an说明shujiang所用shi剂平衡zhi室温,根据jiance标本数量que定所需shi剂的量。

jian查shi剂盒内每种shi剂的贮存tiao件,保证所youshi剂junan照shi剂盒内说明shu推荐的tiao件存储。

jian查不稳定huo者变质的shi剂溶液(比如沉dianhuo变色)。you些shi剂,比如标zhun品xi释液huo者jiancexi释液,可neng在设计shijiu含you沉dian物。所youshi剂在滴入酶标板之前,必需充fen混匀。而you于沉dian物的特性,在加入酶标板之前,必需不停jiao拌。

保证充fen的孵育shi间和温du。

切勿shi用不同生chan批hao的shi剂取代现youshi剂huo混合现youshi剂。

在混合huo溶解蛋白溶液shi,bi免泡沫chan生。

在实yankaishi之前,安排hao实yanliu程。

在实yankaishi之前,qing洁工作台。

若you问题,应yuwo公司huo代理商的技术支硓hi袋/span>

人半胱氨酸蛋白酶抑制剂(CSTA)shi剂盒jie果判断:

1. 每个标zhun品的OD值减去空白孔的OD值后作图,如设zhi复孔,则应取其平jun值计suan。yi标zhun品的nongdu为横坐标,OD值为纵坐标,绘出标zhun曲线。亦可yiOD值为横坐标,标zhun品的nongdu为纵坐标,绘出标zhun曲线。

2. 推荐shi用专业的曲线制作软件,如curve expert 1.3huo1.4,在软件界面ji可根据样品OD值,you标zhun曲线查出xiang应的nongdu,乘yixi释倍数;亦可jiang样品的OD值代入标zhun曲线的拟合fang程式,计suan出样苀ang╠u,再乘yixi释倍数,即为样品的实际nongdu。

3. 若样品OD值高于标zhun曲线shang限,应shi当xi释后重ce,计suannongdushi应乘yixi释倍数。 

半胱氨酸蛋白酶抑制剂(CSTA)shi剂盒you效期稳定性考cha

本shiyanyi半胱氨酸蛋白酶抑制剂(CSTA)为li

1.        OD值:

正常保存tiao件下you效期内和chao过you效期2个月所ceOD值比较

正常you效期内OD值: 3.2512.8452.126, 1.859, 1.463, 1.022, 0.710, 0.08

chao过2个月you效期OD值:3.1.7, 2.643, 2.125, 1.796, 1.453, 0.876, 0.432, 0.07

2.回收lv:fen别于定值血qing及血浆zhong加入一定量的半胱氨酸蛋白酶抑制剂(CSTA)标zhun品,重复ce定并计suan其品jun值,回收lv为ce定值yu理论值的比lv。

        正常保存tiao件下you效期内和过you效期2个月elisa shi剂盒回收lvjiancejie果

Sample

Conditions

Recovery range(%)

Average(%)

Serum(n=6)

normal

88-106

95

After 12 month

80-100

87

EDTA plasma(n=6)

normal

88-106

97

After 12 month

78-98

87

 

3.       线性:fen别于定值血qing及血浆zhong加入一定量的半胱氨酸蛋白酶抑制剂(CSTA)标zhun品,并jiang标本an1:2,1:4,1:8xi释,线性范围即为xi释后样本zhong半胱氨酸蛋白酶抑制剂(CSTA)含量的ce定值yu理论值的比lv。

         正常保存tiao件下you效期内和过you效期2个月elisa shi剂盒回线性jiancejie果

Sample

Conditions

1:2

1:4

1:8

Serum(n=6)

normal

81-92%

85-90%

89-105%

After 12month

80-88%

82-87%

87-101%

EDTA plasma(n=6)

normal

93-104%

81-97%

91-96%

After 12month

82-95%

75-82%

74-90%

 

4.        精密du:yi样品ce定值的变异系数CV表shi。CV%=SD/meanx100

批内差:取同一批次shi剂盒对低值,zhong值和高值样本进行定量jiance,每份样眏ing舛?/span>20次,fen别计suan不同nongdu样本的平jun值和SD值。

批间差:选取 3 个不同批次的shi剂盒fen别对低、zhong、高值定值样本进行定量ce定, 每个样本shi用同一shi剂盒重复ce定 8 次,fen别计suan不同nongdu样本的平jun值及 SD 值。(批内差: CV<10%;批间差: CV<11%)

       正常保存tiao件下you效期内和过you效期2个月elisa shi剂盒回精密dujiancejie果

                    Intra-assay precision

Conditions

normal

After 12month

normal

After 12month

normal

After 12month

sample

1

1

2

2

3

3

n

20

20

20

20

20

20

Mean(ng/ml)

16.68

14.22

70.25

62.36

369.75

327.88

SD

1.08

1.25

4.21

5.31

24.69

32.87

CV(%)

6.5

8.8

6.0

8.5

6.6

10

 

Conditions

normal

After 12month

normal

After 12month

normal

After 12month

Sample

1

1

2

2

3

3

n

20

20

20

20

20

20

Mean(ng/ml)

18.72

13.68

65.98

61.25

387.22

425.26

SD

1.45

1.52

4.83

5.18

28.49

36.87

CV%

7.7

11.1

7.3

8.5

7.3

8.7

人半胱氨酸蛋白酶抑制剂(CSTA)shi剂盒会出现的问题及解决办fa:

1. 加入反应终止液后,没you吸光值huo吸光值偏低。

a.原因:未加入酶标记物。

解决办fa:请an照cao作步骤进行。

b.原因:shi剂盒内rong物未neng充fen回。

解决办fa:que定shi剂盒内rong物回温后再进行cao作。

c.原因:室温太低。

解决办fa:若室温太低(<19),请于cao作步骤4,shi当延长温育shi间。

d.原因:未shi用shi剂盒的qing洗液qing洗。

解决办fa: 请用shi剂盒内所提gong的qing洗液qing洗。

e.原因:shi剂盒已过you效期限。

解决办fa:请更换成仍在you效期限内的shi剂盒。

2. 标zhun曲线线性不佳,huo是平行性不hao。

a.原因:温育位zhibi光不haohuo受到气liugan扰。

解决办fa: 请que认温育位zhiji不透光也不透风(如chou屉内)

b.原因:cao作shi间拖太久。

解决办fa:请在fangfa熟练后再进行cao作。

c.原因:wei縵hun鋢iang互污染。

解决办fa: 加样品shi,请小心勿jian出wei孔外,yi免造成其它wei孔的污染。

d.原因:标zhun品huo酶标记物所加入的量不一zhi。

解决办fa:请shi用已xiao正过的移液枪,并que保其yu吸蚮en鋣ou高du密合性。

e.原因:添加样品huoshi剂的cao作fangfa不正que。

解决办fa:加样品huoshi剂shi,吸头请勿接触wei孔。

f.原因:洗板过程fa生问题(如管路du塞、洗完板后未立刻进行下一步骤)

解决办fa:请suishijian控洗板机洗板过程,洗完后立即进行下一步骤。

3. 吸光值jun偏高(huo线性不够陡)

a.原因:室温太高(>25)

解决办fa: 若无fajiang低室内温du,请shi当缩短步骤4的温育shi间。

b.原因:底物溶液受到污染。

解决办fa: 若fa现底物溶液已呈现淡蓝色,请不yao再shi用。

c.原因:反应shi间chao过太久。

解决办fa:请控制反应shi间。

d.原因ao副昙俏镂廴玖撕心谄渌黶hi剂。

解决办fa:shi用过的吸头应立即丢qi,可bi免shi剂间xiang互污染,凡是shi剂(特别蕅iao副昙俏飝u底物溶液)接触过的rong器应立即qing洗gan净。(先yipiao白水浸泡,再yiqing水冲洗gan净,可que保无残留)

4. 阴性标zhun品的吸光值低于阳性标zhun品的吸光值。

a.原因:wei孔zhong的shi剂未neng充fen混簒iⅫ/span>

解决办fa: shi剂加完后,需轻qiaopan四周shi其充fen混合jun匀。

b.原因:洗板过程fa生问题(2-f.)

解决办fa:请参考2-f.

c.原因:添加样品huo酶标记物的量不一zhi。

解决办fa: 请参考2-d.

 

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