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人脂蛋白a(LP-a)shi剂盒

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da发888真人app名称: 人脂蛋白a(LP-a)shi剂盒
da发888真人app型号: LP-a
da发888真人app展商: ELISAshi剂盒
da发888真人app文档: 无xiang关文档

简单介绍

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人脂蛋白a(LP-a)shi剂盒  的xiang细介绍


人脂蛋白a(LP-a)shi剂盒

shi用shuo明书

人脂蛋白a(LP-a)shi剂盒jibenyuan理:

benshi剂盒采用双da发888真人平tai夹心ELISA法。用kang人LP-ada发888真人平tai包被yumei标板shang,实yan时样品或标准品中的人LP-a与包被da发888真人平tai结合,游离的cheng分被xi去。依ci加入生wu素化的kang人LP-ada发888真人平tai和la根过yang化wumei标记的qin和素。kang人LP-ada发888真人平tai与结合zai包被da发888真人平taishang的人LP-a结合、生wu素与qin和素特异性结合er形cheng**fu合wu,游离的cheng分被xi去。加入显色底wu(TMB),TMBzaila根过yang化wumei的催化下呈现蓝色,加终zhi液后变cheng黄色。用mei标yizai450nm波长处测ODzhi,人LP-a浓du与OD450zhi之间呈正比,通过绘制标准qu线计算出样品中人LP-a的浓du。

人脂蛋白a(LP-a)shi剂盒描述:

英文名称 Human LP-a (Lipoprotein a) ELISA Kit
中文名称 人脂蛋白a(LP-a)meilian**吸附测dingshi剂盒
货号 X-EL-H0160c 种属 Human/人
规格 96T/Kit (8*12 strips) 48T/Kit (8*6 strips)
检测方法 双da发888真人平tai夹心法
检测范围 0.234~15ng/mL 灵敏du 0.141ng/mL

shi剂盒组cheng:

中文名称

英文名称

规格

baocun

  ELISAmei标板(可拆卸)

  Micro ELISA  Plate(Dismountable)

  8×12 / 8×6*

4/-20 #

冻干标准品

Reference Standard

  2/1 *

4/-20 #

标准品&样品稀释液

Reference Standard & Sample Diluent

  1 20mL/12mL*

4

浓缩生wu素化da发888真人平tai

Concentrated Biotinylated Detection Ab

  1 120μL/70μL*

4/-20 #

生wu素化da发888真人平tai稀释液

Biotinytated Detection Ab Diluent

  1 10mL/6mL*

4

浓缩HRPmei结合wu

Concentrated HRP Conjugate

  1 120μL/70μL*

4(bi光)

mei结合wu稀释液

HRP Conjugate Diluent

  1 10mL/6mL*

4

浓缩xi涤液(25×

ConcentratedWashBuffer (25×)

  1 30mL/16mL*

4

底wu溶液(TMB

Substrate Reagent

  1 10mL/6mL*

4(bi光)

反应终zhi液

Stop Solution

  1 10mL/6mL*

4

封板fumo

Plate Sealer

  5/3 zhang*

 

da发888真人appshuo明书

Product  Description

  1 

 

质检报告

Certificate of Analysis

  1 

 

特别shuo明
*: [96T/48T](打kai包zhuang后请及时检cha所有wu品是否齐全完zheng)
#: 
yi周内shi用可cunyu4℃,需长时间cun放或多cishi用建议cunyu-20.                                      

人脂蛋白a(LP-a)shi剂盒检测前准备gong作:

1. 请提前20分钟从bing箱中取出shi剂盒,平heng至室wen。

2. 将浓缩xi涤液用双zheng水稀释(1:25)。未用完的放回4℃。从bing箱中取出的浓缩xi涤液可能有结晶,属yu正常现象,可用40℃水yu微加reshi结晶完全溶解后zai配制xi涤液(加rewendu不yao超过50℃,shi用时xi涤液应为室wen)。当日shi用。

3. 标准品yu10000×g离心1分钟,加入标准品&样品稀释液1.0mL至冻干标准品中,旋紧管盖,静zhi10分钟,shang下颠dao数ci,待其充分溶解后,用移液器将其轻轻混匀(浓du为8000pg/mL)。然后根据需yao进行倍比稀释(注:不yao直接zai反应kong中进行倍比稀释)。建议配制cheng以下浓du:按照稀释方法图例 标准品&样品稀释液直接作为空白kong0ng/mL。如配制5ng/mL标准品:取0.5mL10ng/mL的shang述标准品加入含有0.5mL标准品&样品稀释液的EP管中,混匀ji可,其余浓du依ci类推。 

4. 生wu素化da发888真人平taigong作液:实yan前计算当ci实yan所需用量(以100μL/kong计),实际配制时应多配制100-200μL。shi用前15分钟,以生wu素化da发888真人平tai稀释液稀释浓缩生wu素化da发888真人平tai(1:100)chenggong作浓du。当日shi用。

5. mei结合wugong作液:实yan前计算当ci实yan所需用量(以100μL/kong计),实际配制时应多配制100-200μL。shi用前15分钟,以mei结合wu稀释液稀释浓缩HRPmei结合wu(1:100)chenggong作浓du。

当日shi用。

人脂蛋白a(LP-a)shi剂盒标准品稀释方法图例:(以500μL/管为例,也可根据实际用量来稀释,如200μL/管)

            

1. zai各kong中加入标准品或样品各100μL 37℃fu育90分钟

2. 加入100μ生wu素化da发888真人平taigong作液,37℃fu育60分钟

3. xi涤3ci

4. 加入100μLmei结合wugong作液, 37℃fu育30分钟

5. xi涤5ci

6. 加入90μL底wu溶液, 37℃fu育15分钟左右

7. 加入50μL终zhi液,立jizai450nm波长处测量ODzhi

8. 结guo计算

yi、操作因素对ELISA结guo的ying响ELISA操作步zhoufu杂,操作不当将引qi絰i蟮奈蟛睢R韵聏u述各个步zhou中的ying响因素。

1.加样

2.wen育

3.xi涤

4.显色

5.比色

二、粂i纳鑪hi通常情况下,ELISAding性实yan襶u把粜yu焙汀耙跣yu崩幢ǜ娼醙uo,两者间有yi条分界线被称为“阳性判断zhiao?/span>cut-off valueCOzhi),这是ding性**测ding结guo报告的依据。

三、标benfuchaELISA蕑hiぜ觳夤蘤u杂,ying响因素较多,jishi室内质控zai控,也可能因kong间差异er造cheng结guo的差异,因ci加dafucha力du是bao证结guo准确性的可靠方法,眗e缍狱/span>HBsAgHBeAgHCV-AbHIV-AbTP-Ab等项目的可疑、弱阳性标ben及少见模式的检测结guo进行fucha。

四、结guo判断和报告常用下lie几种方法表shi结guo:

1.ding性测ding

2.半ding量测ding 结guoyi般以didu表shi。

3.ding量测ding ji用yi知量的标准品作yi系lie稀释后进行ELISA测ding,绘制标准qu线,结guo以优良量或单位表shi。zaiELISAding量检测中每yi块反应板都必须绘制xiang应的标准qu线。

注意shi项:

zi细阅dushuo明书。

检chashi剂盒标签shang的有xiaoqi。如guo超过有xiaoqi,请勿shi用。

癱i得魇槿穌ing所有shi剂齐全(数量、体积)。

标ben制备yao规范,每份标ben体积yao按2-3个fukong以shang的量制备(贮cun),尽量穤hong皕uo备份。短qi内无法实yan者,注意低wenbaocun。

准备好所有实yan额外所需wu品,(眗e缫埔浩鳎瑂hi管,qingxi器,mei标yi)。

癱i得魇榻胹hi剂平heng至室wen,根据检测标ben数量确ding所需shi剂的量。

检chashi剂盒内每种shi剂的贮cun条件,bao证所有shi剂均按照shi剂盒内shuo明书推荐的条件cun储。

检cha不稳ding或者变质的shi剂溶液(眗e绯恋砘虮渖S行﹕hi剂,眗e绫曜计废∈鸵夯蛘呒觳庀∈鸵海赡躾ai设计蔮en秃谐恋韜u。所有shi剂zaidi入mei标板之前,必需充分混匀。er由yu沉淀wu的特性,zai加入mei标板之前,必需不停搅拌。

bao证充穤hi膄u育时间和wendu。

切勿shi用不同生chan批号的shi剂取代现有shi剂或混合现有shi剂。

zai混合或溶解蛋白溶液蔮ao琤i免pao沫chan生。

zai实yankai始之前,安排好实yan流程。

zai实yankai始之前,qingjiegong作tai。

ruo有问题,应与wogong司或代理商的ji术支持lian系

人脂蛋白a(LP-a)shi剂盒结guo判断:

1. 每个标准品的ODzhi减去空白kong的ODzhi后作图,如设謒ei磌ong,则应取其平均zhi计算。以标准品的浓du为横坐标,ODzhi为纵坐标,绘出标准qu线。yi可以ODzhi为横坐标,标准品的浓du为纵坐标,绘出标准qu线。

2. 推荐shi用专业的qu线制作软件,如curve expert 1.31.4,zai软件界面既可根据样品ODzhi,由标准qu线cha出xiang应的浓du,乘以稀释倍数;yi可将样品的ODzhi代入标准qu线的拟合方程式,计算出样品浓du,zai乘以稀释倍数,ji为样品的实际浓du。

3. ruo样品ODzhi高yu标准qu线shang限,应适当稀释后重测,计算浓du时应乘以稀释倍数。 

脂蛋白a(LP-a)shi剂盒有xiaoqi稳ding性考察

benshiyan以脂蛋白a(LP-a)为例

1.        ODzhi:

正常baocun条件下有xiaoqi内和超过有xiaoqi2个月所测ODzhi比较

正常有xiaoqi内ODzhi: 3.2512.8452.126, 1.859, 1.463, 1.022, 0.710, 0.08

超过2个月有xiaoqiODzhi:3.1.7, 2.643, 2.125, 1.796, 1.453, 0.876, 0.432, 0.07

2.回收lv:分别yudingzhi血qing及血浆中加入yiding量的脂蛋白a(LP-a)标准品,重fu测dingbing计算其品均zhi,回收lv为测dingzhi与理论zhi的比lv。

        正常baocun条件下有xiaoqi内和过有xiaoqi2个月elisa shi剂盒回收lv检测结guo

Sample

Conditions

Recovery range(%)

Average(%)

Serum(n=6)

normal

88-106

95

After 12 month

80-100

87

EDTA plasma(n=6)

normal

88-106

97

After 12 month

78-98

87

 

3.       线性:分别yudingzhi血qing及血浆中加入yiding量的脂蛋白a(LP-a)标准品,bing将标ben按1:2,1:4,1:8稀释,线性范围ji为稀释后样ben中脂蛋白a(LP-a)含量的测dingzhi与理论zhi的比lv。

         正常baocun条件下有xiaoqi内和过有xiaoqi2个月elisa shi剂盒回线性检测结guo

Sample

Conditions

1:2

1:4

1:8

Serum(n=6)

normal

81-92%

85-90%

89-105%

After 12month

80-88%

82-87%

87-101%

EDTA plasma(n=6)

normal

93-104%

81-97%

91-96%

After 12month

82-95%

75-82%

74-90%

 

4.        精midu:以样品测dingzhi的变异系数CV表shi。CV%=SD/meanx100

批内差:取同yi批cishi剂盒对低zhi,中zhi和高zhi样ben进行ding量检测,每份样ben测ding20ci,分别计算不同浓du样ben的平均zhi和SDzhi。

批间差:选取 3 个不同批ci的shi剂盒分别对低、中、高zhidingzhi样ben进行ding量测ding, 每个样benshi用同yishi剂盒重fu测ding 8 ci,分别计算不同浓du样ben的平均zhi及 SD zhi。(批内差: CV<10%;批间差: CV<11%)

       正常baocun条件下有xiaoqi内和过有xiaoqi2个月elisa shi剂盒回精midu检测结guo

                    Intra-assay precision

Conditions

normal

After 12month

normal

After 12month

normal

After 12month

sample

1

1

2

2

3

3

n

20

20

20

20

20

20

Mean(ng/ml)

16.68

14.22

70.25

62.36

369.75

327.88

SD

1.08

1.25

4.21

5.31

24.69

32.87

CV(%)

6.5

8.8

6.0

8.5

6.6

10

 

Conditions

normal

After 12month

normal

After 12month

normal

After 12month

Sample

1

1

2

2

3

3

n

20

20

20

20

20

20

Mean(ng/ml)

18.72

13.68

65.98

61.25

387.22

425.26

SD

1.45

1.52

4.83

5.18

28.49

36.87

CV%

7.7

11.1

7.3

8.5

7.3

8.7

人脂蛋白a(LP-a)shi剂盒hui出蟴hi奈侍饧敖饩霭旆ǎ裹/span>

1. 加入反应终zhi液后,没有吸光zhi或吸光zhi偏低。

a.yuan因:未加入mei标记wu。

解决办法:请按照操作步zhou进行。

b.yuan因:shi剂盒内容wu未能充分回。

解决办法:确dingshi剂盒内容wu回wen后zai进行操作。

c.yuan因:室wen太低。

解决办法:ruo室wen太低(<19),请yu操作步zhou4,适当延长wen育时间。

d.yuan因:未shi用shi剂盒的qingxi液qingxi。

解决办法: 请用shi剂盒内所提供的qingxi液qingxi。

e.yuan因:shi剂盒yi过有xiaoqi限。

解决办法:请geng换cheng仍zai有xiaoqi限内的shi剂盒。

2. 标准qu线线性不佳,或是平行性不好。

a.yuan因:wen育位zhibi光不好或受到气流干扰。

解决办法: 请确认wen育位zhi既不透光也不透风(如chou屉内)

b.yuan因:操作时间拖太久。

解决办法:请zai方法shu练后zai进行操作。

c.yuan因:微kong间xiang互污染。

解决办法: 加样品蔮ao胄⌒奈鸾Τ鑫ong外,以免造cheng其ta微kong的污染。

d.yuan因:标准品或mei标记wu所加入的量不yi致。

解决办法:请shi用yi校正过的移液枪,bing确bao其与吸头之间有高dumi合衴uⅫ/span>

e.yuan因:添加样品或shi剂的操作方法不正确。

解决办法:加样品或shi剂蔮ao非胛鸾哟ノong。

f.yuan因:xi板过程发生问题(如管路堵塞、xi完板后未立刻进行下yi步zhou)

解决办法:请随时jian控xi板jixi板过程,xi完后立ji进行下yi步zhou。

3. 吸光zhi均偏高(或线性不够陡)

a.yuan因:室wen太高(>25)

解决办法: ruo无法降低室内wendu,请适当缩短步zhou4的wen育时间。

b.yuan因:底wu溶液受到污染。

解决办法: ruo发蟴hi譿u溶液yi呈蟴hi渡氩粂aozaishi用。

c.yuan因:反应时间超过太久。

解决办法:请控制反应时间。

d.yuan因:mei标记wu污染了盒内其tashi剂。

解决办法:shi用过的吸头应立jiding弃,可bi免shi剂间xiang互污染,凡是shi剂(特别是mei标记wu与底wu溶液)接触过的容器应立jiqingxi干净。(xian以漂白水浸pao,zai以qing水冲xi干净,可确bao无残liu)

4. 阴性标准品的吸光zhi低yu阳性标准品的吸光zhi。

a.yuan因:微kong中的shi剂未能充分混合。

解决办法: shi剂加完后,需轻敲盘四周shi其充分混合均匀。

b.yuan因:xi板过程发生问题(2-f.)

解决办法:请参考2-f.

c.yuan因:添加样品或mei标记wu的量不yi致。

解决办法: 请参考2-d.

 

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