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人5脂加氧酶(5-LO)试剂盒

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大fa888真人app名称: 人5脂加氧酶(5-LO)试剂盒
大fa888真人appxing号: 5-LO
大fa888真人appzhanshang: ELISA试剂盒
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简dan介绍

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人5脂加氧酶(5-LO)试剂盒  的详xi介绍


人5脂加氧酶(5-LO)试剂盒

使用说ming书

人5脂加氧酶(5-LO)试剂盒基ben原理:

ben试剂盒采用双大fa888真人平台夹心ELISA法。用抗人5-LO大fa888真人平台包被于酶标板上,实yan时样品或标zhun品中的人5-LO与包被大fa888真人平台结合,游离的成分被洗qu。依次加入生物素化的抗人5-LO大fa888真人平台和辣根过氧化物酶标记的亲和素。抗人5-LO大fa888真人平台与结合在包被大fa888真人平台上的人5-LO结合、生物素与亲和素特异性结合而形成**复合物,游离的成分被洗qu。加入显色底物(TMB),TMB在辣根过氧化物酶的催化下呈现蓝色,加终止液hou变成huang色。用酶标仪在450nm波长处测ODzhi,人5-LO浓du与OD450zhi之间呈正比,通过绘制标zhun曲线ji算出样品中人5-LO的浓du。

人5脂加氧酶(5-LO)试剂盒描述:

ying文名称 Human 5-LO (Arachidonate 5-Lipoxygenase) ELISA Kit
中文名称 人5脂加氧酶(5-LO)酶联**xi附测定试剂盒
货号 X-EL-H0223c 种属 Human/人
规格 96T/Kit (8*12 strips) 48T/Kit (8*6 strips)
检测方法 双大fa888真人平台夹心法
检测fan围 0.156~10ng/mL 灵敏du 0.094ng/mL

人5脂加氧酶(5-LO)试剂盒zu成:

中文名称

ying文名称

规格

保cun

  ELISA酶标板(可chai卸)

  Micro ELISA  Plate(Dismountable)

  8×12 / 8×6*

4/-20 #

冻干标zhun品

Reference Standard

  2/1 zhi*

4/-20 #

标zhun品&样品稀释液

Reference Standard & Sample Diluent

  1 20mL/12mL*

4

浓缩生物素化大fa888真人平台

Concentrated Biotinylated Detection Ab

  1zhi 120μL/70μL*

4/-20 #

生物素化大fa888真人平台稀释液

Biotinytated Detection Ab Diluent

  1 10mL/6mL*

4

浓缩HRP酶结合物

Concentrated HRP Conjugate

  1zhi 120μL/70μL*

4(bi光)

酶结合物稀释液

HRP Conjugate Diluent

  1 10mL/6mL*

4

浓缩洗di液(25×

ConcentratedWashBuffer (25×)

  1 30mL/16mL*

4

底物溶液(TMB

Substrate Reagent

  1 10mL/6mL*

4(bi光)

反ying终止液

Stop Solution

  1 10mL/6mL*

4

封板竎ai|/span>

Plate Sealer

  5/3 *

 

大fa888真人app说ming书

Product  Description

  1 fen

 

謘hi靊aogao

Certificate of Analysis

  1 fen

 

特别说ming
*: [96T/48T](打开包zhuanghou请及时检查所有物品是否齐quan完zheng)
#: 
一周内使用可cun于4℃,xu长时间cunfang或多次使用jian议cun于-20.                                      

人5脂加氧酶(5-LO)试剂盒检测前zhun备工zuo:

1. 请提前20分钟从冰箱中取出试剂簒iao胶庵潦椅longⅫ/span>

2. 将浓缩洗di液用双蒸水稀释(1:25)。未用完的fang回4℃。从冰箱中取出的浓缩洗di液可能有结晶,属于正chang现象,可用40℃水浴微加热使结晶完quan溶解hou再配制洗di液(加热wendu不yao超过50℃,使用时洗di液ying为室wen)。dang日使用。

3. 标zhun品10000×g离心1分钟,加入标zhun品&样品稀释液1.0mL至冻干标zhun品謝iao艄芨牵琷ing置10分钟,上下颠倒数次,daiqichong分溶解hou,用移液器将qi轻轻混匀(浓du为8000pg/mL)。然hou根据xuyaojin行倍比稀释(注:不yao直接在反ying孔中jin行倍比稀释)。jian议配制成yi下浓du:an照稀释方法图li 标zhun品&样品稀释液直接zuo为空白孔0ng/mL。ru配制5ng/mL标zhun品:取0.5mL10ng/mL的上述标zhun品加入含有0.5mL标zhun品&样品稀释液的EP管謝iao煸燃纯桑琿iyu浓du依此类推。 

4. 生物素化大fa888真人平台工zuo液:实yan前ji算dang次实yan所xu用量(yi100μL/縵hun疲导逝渲剖眣ing多配制100-200μL。使用前15分钟,yi生物素化大fa888真人平台稀释液稀释浓缩生物素化大fa888真人平台(1:100)成工zuo浓du。dang日使用。

5. 酶结合物工zuo液:实yan前ji算dang次实yan所xu用量(yi100μL/縵hun疲导逝渲剖眣ing多配制100-200μL。使用前15分钟,yi酶结合物稀释液稀释浓缩HRP酶结合物(1:100)成工zuo浓du。

dang日使用。

人5脂加氧酶(5-LO)试剂盒标zhun品稀释方法图li:(yi500μL/管为li,也可根据实际用量来稀释,ru200μL/管)

            

1. 在ge孔中加入标zhun品或样品ge100μL 37℃孵yu90分钟

2. 加入100μ生物素化大fa888真人平台工zuo液,37℃孵yu60分钟

3. 洗di3

4. 加入100μL酶结合物工zuo液, 37℃孵yu30分钟

5. 洗di5

6. 加入90μL底物溶液, 37℃孵yu15分钟左右

7. 加入50μL终止液,立即在450nm波长处测量ODzhi

8. 结果ji算

一、操zuo因素对ELISA结果的影xiangELISA操zuobu骤复杂,操zuo不dang将引起较大的误差。yi下叙述ge个bu骤中的影xiang因素。

1.加样

2.wenyu

3.洗di

4.显色

5.比色

二、灰qu的设置通chang情况下,ELISA定性实yanyi“阳性”和“阴性”来baogao结果,两者间有一条分jie线被称为“阳性判断zhi”(cut-off valueCOzhi),这是定性**测定结果baogao的依据。

三、标ben复查ELISA手工检测过程复杂,影xiang因素较多,即使室内质控在控,也可能因縵hun洳钜於鴝ao成结果的差异,因此加大复查lidu是保证结果zhun确性的可靠方法,比ru对HBsAgHBeAgHCV-AbHIV-AbTP-Ab等xiang目的可疑、弱阳性标ben及shaojian模式的检测结果jin行复查。

si、结果判断和baogaochang用下列几謟hi椒╞iao示结果:

1.定性测定

2.半定量测定 结果一banyi滴dubiao示。

3.定量测定 即用已知量的标zhun品zuo一系列稀释houjin行ELISA测定,绘制标zhun曲线,结果yi优良量或dan位biao示。在ELISA定量检测中每一块反ying板都必须绘制相ying的标zhun曲线。

注意事xiang:

仔xi阅读说ming书。

检查试剂盒标签上的有xiao期。ru果超过有xiao期,请勿使用。

an说ming书萬anㄋ惺约疗雚uan(数量、体ji)。

标ben制备yao规fan,每fen标ben体jiyaoan2-3个复孔yi上的量制备(贮cun),尽量分zhuangzuo备fen。短期内无法实yan者,注意低wen保cun。

zhun备好所有实yan额外所xu物品,(比ru移液器,试管,清洗器,酶标仪)。

an说ming书将所用试剂平衡至室wen,根据检测标ben数量萬anㄋ鵻u试剂的量。

检查试剂盒内每种试剂的贮cun条件,保证所有试剂junan照试剂盒内说ming书推荐的条件cun储。

检查不稳定或者变质的试剂溶液(比ru沉淀或变色)。有些试糽i萺u标zhun品稀释液或者检测稀释液,可能在设ji蔮en秃谐恋砦铩K惺约猎诘稳朊副臧逯埃豿uchong分混匀。而由于沉淀物的特性,在加入酶标板之前,必xu不停搅拌。

保证chong穤hi姆鮵u时间和wendu。

切勿使用不同生产批号的试剂取代现有试剂或混合现有试剂。

在混合或溶解蛋白溶液时,bi免泡沫产生。

在实yan开shi之前,安排好实yan流程。

在实yan开shi之前,清洁工zuo台。

若有问题,ying与我gong薺ing虼韘hang的技术zhichi联系

结果判断:

1. 每个标zhun品的ODzhi减qu空白孔的ODzhihouzuo图,ru设置复孔,则ying取qi平junzhiji算。yi标zhun品的浓du为横坐标,ODzhi为纵坐标,绘出标zhun曲线。亦可yiODzhi为横坐标,标zhun品的浓du为纵坐标,绘出标zhun曲线。

2. 推荐使用专业的曲线制zuo软件,rucurve expert 1.31.4,在软件jie面既可根据样品ODzhi,由标zhun曲线查出相ying的浓du,chengyi稀释倍数;亦可将样品的ODzhi代入标zhun曲线的拟合方程式,ji算出样苀ang╠u,再chengyi稀释倍数,即为样品的实际浓du。

3. 若样品ODzhi高于标zhun曲线上xian,yingshidang稀释hou重测,ji算浓du时yingchengyi稀释倍数。 

5脂加氧酶(5-LO)试剂盒有xiao期稳定性考cha

ben试yanyi5脂加氧酶(5-LO)为li

1.        ODzhi:

正chang保cun条件下有xiao期内和超过有xiao期2个月所测ODzhi比较

正chang有xiao期内ODzhi: 3.2512.8452.126, 1.859, 1.463, 1.022, 0.710, 0.08

超过2个月有xiao期ODzhi:3.1.7, 2.643, 2.125, 1.796, 1.453, 0.876, 0.432, 0.07

2.回收率:分别于定zhi血清及血浆中加入一定量的5脂加氧酶(5-LO)标zhun品,重复测定并ji算qi品junzhi,回收率为测定謉i肜砺踷hi的比率。

        正chang保cun条件下有xiao期内和过有xiao期2个月elisa 试剂盒回收聅hi觳饨峁?/span>

Sample

Conditions

Recovery range(%)

Average(%)

Serum(n=6)

normal

88-106

95

After 12 month

80-100

87

EDTA plasma(n=6)

normal

88-106

97

After 12 month

78-98

87

 

3.       线性:分别于定zhi血清及血浆中加入一定量的5脂加氧酶(5-LO)标zhun品,并将标benan1:2,1:4,1:8稀释,线性fan围即为稀释hou样ben中5脂加氧酶(5-LO)含量的测定謉i肜砺踷hi的比率。

         正chang保cun条件下有xiao期内和过有xiao期2个月elisa 试剂盒回线性检测结果

Sample

Conditions

1:2

1:4

1:8

Serum(n=6)

normal

81-92%

85-90%

89-105%

After 12month

80-88%

82-87%

87-101%

EDTA plasma(n=6)

normal

93-104%

81-97%

91-96%

After 12month

82-95%

75-82%

74-90%

 

4.        精密du:yi样品测定zhi的变异系数CVbiao示。CV%=SD/meanx100

批内差:取同一批次试剂盒对低zhi,中zhi和高zhi样benjin行定量检测,每fen样ben测定20次,分别ji算不同浓du样ben的平junzhi和SDzhi。

批间差:选取 3 个不同批次的试剂盒分别对低、中、高zhi定zhi样benjin行定量测定, 每个样ben使用同一试剂盒重复测定 8 次,分别ji算不同浓du样ben的平junzhi及 SD zhi。(批内差: CV<10%;批间差: CV<11%)

       正chang保cun条件下有xiao期内和过有xiao期2个月elisa 试剂盒回精密du检测结果

                    Intra-assay precision

Conditions

normal

After 12month

normal

After 12month

normal

After 12month

sample

1

1

2

2

3

3

n

20

20

20

20

20

20

Mean(ng/ml)

16.68

14.22

70.25

62.36

369.75

327.88

SD

1.08

1.25

4.21

5.31

24.69

32.87

CV(%)

6.5

8.8

6.0

8.5

6.6

10

 

Conditions

normal

After 12month

normal

After 12month

normal

After 12month

Sample

1

1

2

2

3

3

n

20

20

20

20

20

20

Mean(ng/ml)

18.72

13.68

65.98

61.25

387.22

425.26

SD

1.45

1.52

4.83

5.18

28.49

36.87

CV%

7.7

11.1

7.3

8.5

7.3

8.7

人5脂加氧酶(5-LO)试剂盒hui出蟴hi奈侍饧敖饩霭旆ǎ裹/span>

1. 加入反ying终止液hou,没有xi光zhi或xi光zhi偏低。

a.原因:未加入酶标记物。

解决办法:请an照操zuobu骤jin行。

b.原因:试剂盒内rong物未能chong分回。

解决办法:萬anㄊ约梁心趓ong物回wenhou再jin行操zuo。

c.原因:室wen太低。

解决办法:若室wen太低(<19),请于操zuobu骤4,shidang延长wenyu时间。

d.原因:未使用试剂盒的清洗液清洗。

解决办法: 请用试剂盒内所提gong的清洗液清洗。

e.原因:试剂盒已过有xiao期xian。

解决办法:请genghuan成仍在有xiao期xian内的试剂盒。

2. 标zhun曲线线性不佳,或是平行性不好。

a.原因:wenyu位置bi光不好或受到气流干扰。

解决办法: 请确认wenyu位置既不透光也不透风(ru抽屉内)

b.原因:操zuo时间拖太久。

解决办法:请在方法shu练hou再jin行操zuo。

c.原因:微縵hun湎嗷ノ踨an。

解决办法: 加样品时,请小心勿溅出微孔外,yi免zao成qi它微孔的污ran。

d.原因:标zhun品或酶标记物所加入的量不一謑ongⅫ/span>

解决办法:请使用已xiao正过的移液qiang,并确保qi与xi头之间有高du密合性。

e.原因:tian加样品或试剂的操zuo方法不正确。

解决办法:加样品或试剂时,xi头请勿接触微孔。

f.原因:洗板过程fa生问题(ru管耭an氯⑾赐臧録ou未立kejin行下一bu骤)

解决办法:请sui时监控洗板机洗板过程,洗完hou立即jin行下一bu骤。

3. xi光zhijun偏高(或线性不够dou)

a.原因:室wen太高(>25)

解决办法: 若无法降低室内wendu,请shidang缩短bu骤4的wenyu时间。

b.原因:底物溶液受到污ran。

解决办法: 若fa蟴hi孜锶芤阂殉氏zhi渡氩粂ao再使用。

c.原因:反ying时间超过太久。

解决办法:请控制反ying时间。

d.原因:酶标记物污ran了盒内qi它试剂。

解决办法:使用过的xi头ying立即丢弃,可bi免试剂间相互污ran,凡是试剂(特别是酶标记物与底物溶液)接触过的rong器ying立即清洗干jing。(先yi漂白水浸泡,再yi清水冲洗干jing,可确保无残留)

4. 阴性标zhun品的xi光zhi低于阳性标zhun品的xi光zhi。

a.原因:微孔中的试剂未能chong分混合。

解决办法: 试剂加完hou,xu轻敲盘si周使qichong分混合jun匀。

b.原因:洗板过程fa生问题(2-f.)

解决办法:请参考2-f.

c.原因:tian加样品或酶标记物的量不一謑ongⅫ/span>

解决办法: 请参考2-d.

 

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