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大鼠钙lian蛋白(CNX)meilian免yi吸附jiance试剂盒

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大fa888真人app名称: 大鼠钙lian蛋白(CNX)meilian免yi吸附jiance试剂盒
大fa888真人app型hao: (CNX
大fa888真人app展商: ELISA试剂盒
大fa888真人app文dang: 无相guan文dang

简单介绍

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大鼠钙lian蛋白(CNX)meilian免yi吸附jiance试剂盒  的详细介绍

大鼠钙lian蛋白(CNX)meilian**吸附jiance试剂盒

使用说明shu

预qiying用

本试剂盒yun用双大fa888真人平taijia心ELISA法定量ce定大鼠血清、血浆、组织匀浆、细baolie解液、细baopei养上清液he其他生物液体中钙lian蛋白(CNX)含量。

大鼠钙lian蛋白(CNX)meilian**吸附jiance试剂盒基本原理:

本试剂盒cai用双大fa888真人平taijia心ELISA法。用抗大鼠钙lian蛋白(CNX)大fa888真人平tai包bei于mei标板上,实验时样品或标准品中的大鼠钙lian蛋白(CNX)与包bei大fa888真人平tai结he,游离的成分beixi去。依ci加入生物素化的抗大鼠钙lian蛋白(CNX)大fa888真人平taihela根过氧化物mei标记的亲he素。抗大鼠钙lian蛋白(CNX)大fa888真人平tai与结he在包bei大fa888真人平tai上的大鼠钙lian蛋白(CNX)结he、生物素与亲he素特yi性结he而形成**复he物,游离的成分beixi去。加入显色底物(TMB),TMB在la根过氧化物mei的催化下呈现蓝色,加终zhi液hou变成黄色。用mei标仪在450nm波长处ceOD值,大鼠钙lian蛋白(CNX)nong度与OD450值zhi间硈hou齜i,tong过绘制标准曲线计算出样品中大鼠钙lian蛋白(CNX)的nong秖u

描述:

英文名称 Rat CNX (Calnexin) ELISA Kit
中文名称 大鼠钙lian蛋白(CNX)meilian**吸附ce定试剂盒
货hao X-EL-R0141c 种属 Rat/大鼠
规格 96T/Kit (8*12 strips) 48T/Kit (8*6 strips)
jiance方法 双大fa888真人平taijia心法
jiance范围 0.156~10ng/mL 灵敏度 0.094ng/mL

组成:

中文名称

英文名称

规格

bao存

  ELISAmei标板(可拆xie)

  Micro ELISA  Plate(Dismountable)

  8×12 / 8×6*

4/-20 #

donggan标准品

Reference Standard

  2/1 *

4/-20 #

标准品&样品稀释液

Reference Standard & Sample Diluent

  1 20mL/12mL*

4

nong缩生物素化大fa888真人平tai

Concentrated Biotinylated Detection Ab

  1 120μL/70μL*

4/-20 #

生物素化大fa888真人平tai稀释液

Biotinytated Detection Ab Diluent

  1 10mL/6mL*

4

nong缩HRPmei结he物

Concentrated HRP Conjugate

  1 120μL/70μL*

4(避光)

mei结he物稀释液

HRP Conjugate Diluent

  1 10mL/6mL*

4

nong缩xidi液(25×

ConcentratedWashBuffer (25×)

  1 30mL/16mL*

4

底物溶液(TMB

Substrate Reagent

  1 10mL/6mL*

4(避光)

反ying终zhi液

Stop Solution

  1 10mL/6mL*

4

封板覆膜

Plate Sealer

  5/3 *

 

大fa888真人app说明shu

Product  Description

  1 

 

质jian报告

Certificate of Analysis

  1 

 

特别说明
*: [96T/48T](da开包装hou请ji时jiancha所有物品shi否qiquan完整)
#: 
一周内使用可存于4℃,需长时间存放或duoci使用建议存于-20.                                      

大鼠钙lian蛋白(CNX)meilian**吸附jiance试剂盒jiance前准备工作:

1. 请提前20分钟从冰箱中qu出试剂簒iao胶庵潦椅long

2. jiangnong缩xidi液用双蒸水稀释(1:25)。wei用完的放回4℃。从冰箱中qu出的nong缩xidi液可能有结晶,属于正常现xiang,可用40℃水浴微加热使结晶完quan溶解houzai配制xidi液(加热温度不要超过50℃,使用时xidi液ying为室温)。dang日使用。

3. 标准品: 于10000×g离心1分钟,加入标准品&样品稀释液1.0mL至donggan标准品謝iao艄芨牵仓?0分钟,上下颠倒数ci,待其充分溶解hou,用移液器jiang其轻轻混匀(nong度为10ng/mL)。然hou根据需要jin行倍bi稀释(注:不要直接在反ying孔中jin行倍bi稀释)。建议配制成以下nong度:按zhao稀释方法tu例 标准品&样品稀释液直接作为空白孔0ng/mL。如配制5ng/mL标准品:qu0.5mL10ng/mL的上述标准品加入含有0.5mL标准品&样品稀释液的EP管謝iao煸燃纯桑溆鄋ong度依此lei推。 

4. 生物素化大fa888真人平tai工作液:实验前计算dangci实验所需用量(以100μL/孔计),实际配制时yingduo配制100-200μL。使用前15分钟,以生物素化大fa888真人平tai稀释襤e∈蚽ong缩生物素化大fa888真人平tai(1:100)成工作nong秖uang日使用。

5. mei结he物工作液:实验前计算dangci实验所需用量(以100μL/孔计),实际配制时yingduo配制100-200μL。使用前15分钟,以mei结he物稀释襤e∈蚽ong缩HRPmei结he物(1:100)成工作nong秖u

dang日使用。

大鼠钙lian蛋白(CNX)meilian**吸附jiance试剂盒标准品稀释方法tu例:(以500μL/管为例,也可根据实际用量来稀释,如200μL/管)

1.使用前jiang所有的试剂he标眏ing郝庵潦椅咙span>(18-25oC),试剂不能直接在37oC溶解。

2.标准品(donggan品):每瓶标准品加入标准品稀释液1mL,盖好hou室温静置大约10分钟,tong时反复颠倒/搓动以助溶解,其nong度为10ng/mL。准备7个稀释标准品的EP管,每个EP管中加入500μL的标准品稀释液,如tu所shi依ci倍bi稀释,标准品稀释液(0pg/mL)直接作为空白孔。为bao证实验结果有xiao性,每ci实验请使用新的标准品溶液。

      

1. 在ge孔中加入标准品或样品ge100μL, 37℃孵育90分钟

2. 加入100μL 生物素化大fa888真人平tai工作液,37℃孵育60分钟

3. xidi3ci

4. 加入100μLmei结he物工作液, 37℃孵育30分钟

5. xidi5ci

6. 加入90μL底物溶液, 37℃孵育15分钟左you

7. 加入50μL终zhi液,立即在450nm波长处ce量OD值

8. 结果计算

一、操作因素对ELISA结果的ying响ELISA操作步骤复za,操作不dangjiang引qi絰i蟮奈蟛睢R韵滦鹗鰃e个步骤中的ying响因素。

1.加样

2.温育

3.xidi

4.显色

5.bi色

二、灰区的设置tong常qing况下,ELISA定性实验以“yang性”he“阴性”来报告结果,两者间有一tiao分界线bei称为“yang性舩ie现怠bao╟ut-off value,CO值),这shi定性**ce定结果报告的依据。

三、标本复chaELISA蕑hiiance过cheng复za,ying响因素较duo,即使室内质控在控,也可能因孔间差yi而造成结果的差yi,因此加大复cha力度shibao证结果准确性的可靠方法,bi如对HBsAg、HBeAg、HCV-Ab、HIV-Ab、TP-Ab等项目的可疑、弱yang性标本ji少见模式的jiance结果jin行复cha。

四、结果舩ie蟞e报告常用下列几謟hi椒ū韘hi结果:

1.定性ce定

2.半定量ce定 结果一般以滴度表shi。

3.定量ce定 即用已知量的标准品作一系列稀释houjin行ELISAce定,绘制标准曲线,结果以you良量或单位表shi。在ELISA定量jiance中每一块反ying板du必须绘制相ying的标准曲线。

大鼠钙lian蛋白(CNX)meilian**吸附jiance试剂盒会出现的问题ji解jueban法:

1. 加入反ying终zhi液hou,mei有吸光值或吸光值偏低。

a.原因:wei加入mei标记物。

解jueban法:请按zhao操作步骤jin行。

b.原因:试剂盒内容物wei能充分回。

解jueban法:确定试剂盒内容物回温houzaijin行操作。

c.原因:室温太低。

解jueban法:若室温太低(<19℃),请于操作步骤4,适dang延长温育时间。

d.原因:wei使用试剂盒的清xi液清xi。

解jueban法: 请用试剂盒内所提供的清xi液清xi。

e.原因:试剂盒已过有xiaoqi限。

解jueban法:请更换成仍在有xiaoqi限内的试剂盒。

2. 标准曲线线性不佳,或shi平行性不好。

a.原因:温育位置避光不簃ei蚴躣ao气流ganrao。

解jueban法: 请确认温育位置既不透光也不透风(如抽屉内)。

b.原因:操作时间拖太久。

解jueban法:请在方法熟练houzaijin行操作。

c.原因:微孔间相huwu染。

解jueban法: 加样品蔮ao胄⌒奈鸾Τ鑫⒖淄猓悦庠斐善渌⒖椎膚u染。

d.原因:标准品或mei标记物所加入的量不一謑ong

解jueban法:请使用已xiao正过的移液枪,bing确bao其与吸头zhi间有高度密he性。

e.原因:tian加样品或试剂的操作方法不正确。

解jueban法:加样品或试剂蔮ao非胛鸾哟ノ⒖住

f.原因e窗骞齝hengfa生问题(如管路堵塞、xi完板houwei立刻jin行下一步骤)。

解jueban法:请sui时监控xi板机xi板过cheng,xi完hou立即jin行下一步骤。

3. 吸光值均偏高(或线性不够dou)。

a.原因:室温太高(>25℃)。

解jueban法: 若无法絛ang褪夷谖露龋胧蔰ang缩duan步骤4的温育时间。

b.原因:底物溶液受daowu染。

解jueban法: 若fa现底物溶液已呈现淡蓝色,请不要zai使用。

c.原因:反ying时间超过太久。

解jueban法:请控制反ying时间。

d.原因:mei标记物wu染liao盒内其它试剂。

解jueban法:使用过的吸头ying立即ding弃,可避免试剂间相huwu染,fanshi试剂(特别shimei标记物与底物溶液)接触过的容器ying立即清xiganjing。(xian以漂白水jin泡,zai以清水冲xiganjing,可确bao无canliu)

4. 阴性标准品的吸光謉ang陀趛ang性标准品的吸光值。

a.原因:微孔中的试剂wei能充分混he。

解jueban法: 试剂加完hou,需轻敲盘四周使其充分混he均詑u

b.原因e窗骞齝hengfa生问题(tong2-f.)。

解jueban法:请参考2-f.

c.原因:tian加样品或mei标记物的量不一謑ong

解jueban法: 请参考2-d.

注意事项:

A 仔细yue秎iao得鱯hu。

B jiancha试剂盒标qian上的有xiaoqi。如果超过有xiaoqi,请勿使用。

C 按说明shu确定所有试剂qiquan(数量、体积)。

D 标本制备要规范,每份标本体积要按2-3个复孔以上的量制备(贮存),尽量分装做备份。duanqi内无法实验者,注意低温bao存。

E 准备好所有实验e外所需物品,(bi如移液器,试管,清xi器,mei标仪)。

F 按说明shujiang所用试剂平衡至室温,根据jiance标本数量确定所需试剂的量。

G jiancha试剂盒内每种试剂的贮存tiaojian,bao证所有试剂均按zhao试剂盒内说明shu推荐的tiaojian存chu。

H jiancha不稳定或者变质的试剂溶液(bi如沉淀或变色)。有xie试剂,bi如标准品稀释液或者jiance稀释液,可能在设计时jiu含有沉淀物。所有试剂在滴入mei标板zhi前,必需充分混詑u6捎诔恋砦锏奶匦裕诩尤雖ei标板zhi前,必需不停jiao拌。

I bao证充分的孵育时间he温秖u

J 切勿使用不tong生产批hao的试剂qu代现有试剂或混he现有试剂。

K 在混he或溶解蛋白溶液蔮ao苊馀菽

L 在实验开始zhi前,安排好实验流cheng。

M 在实验开始zhi前,清洁工作tai。

N 若有问题,ying与我gong薺ing虼砩痰募际踔С謑ian系

大鼠钙lian蛋白(CNX)meilian**吸附jiance试剂盒结果舩ie吸/b>:

1. 每个标准品的OD值减去空白孔的OD值hou作tu,如设謒ei纯祝騳ingqu其平均值计算。以标准品的nong度为横坐标,OD值为纵坐标,绘出标准曲线。亦可以OD值为横坐标,标准品的nong度为纵坐标,绘出标准曲线。

2. 推荐使用专襠ang那咧谱魅韏ian,如curve expert 1.3或1.4,在软jian界mian既可根据样品OD值,由标准曲线cha出相ying的nong度,cheng以稀释倍数;亦可jiang样品的OD值代入标准曲线的拟he方cheng式,计算出样品nong度,zaicheng以稀释倍数,糲i返氖导蕁ong秖u

3. 若样品OD值高于标准曲线上限,ying适dang稀释hou重ce,计算nong度时yingcheng以稀释倍数。

 特yi性:

本试剂盒用于jiance大鼠钙lian蛋白(CNX),jingjiance与其它相似物质无明显交叉反ying。

由于受dao技术ji样本来源的限制,不可能完成秠un邢鄃uan或相似物质交叉反yingjiance,因此本试剂盒有可能与weijingjiance的其它物质有交叉反ying。

回shou率:

分别于定值血清ji血浆样本中加入襤uan康拇笫蟾苐ian蛋白(CNX)(加标样品),重复ce定bing计算其均值,回shou率为ce定謉i肜砺壑dang腷i率

线性:

在定值血清ji血浆样本内加入适量的大鼠钙lian蛋白(CNX),bing倍bi稀释成 1:21:41:81:16 的待ce样本,线性范围糲i∈蚳ou样本中大鼠钙lian蛋白(CNX)含量的ce定謉i肜砺壑dang腷i率。


大鼠钙lian蛋白(CNX)meilian**吸附jiance试剂盒精密度:

精密度用样苀an舛ㄖdang谋鋣i系数 CV 表shi。CV(%) = SD/mean×100

批内差:qutong批ci试剂簒ie缘汀⒅小⒏咧刀ㄖ笛緅in衳ie縥iance,每份样本连续ce定 20 ci,分别计算不tongnong度样本的平均值ji SD 值。

批间差:选qu 3 个不tong批ci的试剂盒分别对低、中、高值定值样本jin衳ie縞e定,每个样本使用tong一试剂盒重复

ce定 8 ci,分别计算不tongnong度样本的平均值ji SD 值。

批内差: CV<10%

批间差: CV<12%

稳定性:

jingce定,试剂盒在有xiaoqi内按推荐温度bao存,其活性絛ang吐市∮冱span> 5%。

为减小外部因素对试剂盒破坏前houjiance謉ang膟ing响,实验室的huan綾heng鮦ian需尽量bao持一致,尤其shi实验室内温秖u⑹萰i温育tiaojian。其ci由tong一实验员来jin行操作可减少人为误差。


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