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大鼠甲胎蛋白(αFP)酶lian免疫xi附检测试剂he

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大发888zhenrenapp名称: 大鼠甲胎蛋白(αFP)酶lian免疫xi附检测试剂he
大发888zhenrenapp型号: αFP
大发888zhenrenapp展shang: ELISA试剂he
大发888zhenrenapp文档: 无xiang关文档

简单介绍

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大鼠甲胎蛋白(αFP)酶lian免疫xi附检测试剂he  的详细介绍

大鼠甲胎蛋白(αFP)酶lian**xi附检测试剂he

使用说明书

yu期应用

本试剂he运用双大发888zhenren平台夹心ELISA法定量测定大鼠血清、血浆、组织yun浆、细胞裂解液、细胞培yang上清液簍ui鋞a生物液体中甲胎蛋白(αFP)含量。

大鼠甲胎蛋白(αFP)酶lian**xi附检测试剂he基本原理:

本试剂he采用双大发888zhenren平台夹心ELISA法。用抗大鼠甲胎蛋白(αFP)大发888zhenren平台包被于酶biaoban上,实yan时样品或biao譲i分械拇笫蠹滋サ鞍?αFP)yu包被大发888zhenren平台结he,游li的成分被洗去。依ci加入生物素化祄u勾笫蠹滋サ鞍?αFP)大发888zhenren平台和辣根过氧化物酶biao记的亲和素。抗大鼠甲胎蛋白(αFP)大发888zhenren平台yu结簒ian诎淮蠓?88zhenren平台上的大鼠甲胎蛋白(αFP)结he、生物素yu亲和素特异性结he而xing成**复he物,游li的成分被洗去。加入xian色底物(TMB),TMB在辣根过氧化物酶的催化下cheng现蓝色,加终zhi液hou变成黄色。用酶biao仪在450nmbo长chu测ODzhi,大鼠甲胎蛋白(αFP)浓duyuOD450zhi之间cheng正比,通过绘制biao准曲线jisuan出样品中大鼠甲胎蛋白(αFP)的浓du。

描述:

ying文名称 Rat αFP (Alpha-Fetoprotein) ELISA Kit
謝ing拿劈/span> 大鼠甲胎蛋白(αFP)酶lian**xi附测定试剂he
货号 X-EL-R0153c 种属 Rat/大鼠
规格 96T/Kit (8*12 strips) 48T/Kit (8*6 strips)
检测方法 双大发888zhenren平台夹心法
检测范围 0.313~20ng/mL 灵敏du 0.188ng/mL

组成:

謝ing拿劈/span>

ying文名称

规格

保存

  ELISA酶biaoban(可chaixie)

  Micro ELISA  Plate(Dismountable)

  8×12 / 8×6*

4/-20 #

冻干biao譲i饵/span>

Reference Standard

  2/1 *

4/-20 #

biao譲i饵/span>&样品稀释液

Reference Standard & Sample Diluent

  1ping 20mL/12mL*

4

浓缩生物素化大发888zhenren平台

Concentrated Biotinylated Detection Ab

  1 120μL/70μL*

4/-20 #

生物素化大发888zhenren平台稀释液

Biotinytated Detection Ab Diluent

  1ping 10mL/6mL*

4

浓缩HRP酶结he物

Concentrated HRP Conjugate

  1 120μL/70μL*

4(bi光)

酶结he物稀释液

HRP Conjugate Diluent

  1ping 10mL/6mL*

4

浓缩洗di液(25×

ConcentratedWashBuffer (25×)

  1ping 30mL/16mL*

4

底物溶液(TMB

Substrate Reagent

  1ping 10mL/6mL*

4(bi光)

反应终zhi液

Stop Solution

  1ping 10mL/6mL*

4

封ban覆膜

Plate Sealer

  5/3 *

 

大发888zhenrenapp说明书

Product  Description

  1 

 

謘hi靊ao告

Certificate of Analysis

  1 

 

特别说明
*: [96T/48T](打kai包装hou请ji时检查所觴ing锲肥欠衿肴暾?/span>
#: 
一zhouna使用可存于4℃,需长时间存fang或多ci使用建议存于-20.                                      

大鼠甲胎蛋白(αFP)酶lian**xi附检测试剂he检测前准备工作:

1. 请提前20分钟从冰xiang中取出试剂he,平衡至室蝜ong

2. 将浓缩洗di液用双蒸水稀释(1:25)。wei用完的fang回4℃。从冰xiang中取出的浓缩洗di液可能有结晶,属于正常现xiang,可用40℃水浴微加热使结晶完全溶解houzai配制洗di液(加热温du不要chao过50℃,使用时洗di液应为室温)。当日使用。

3. biao譲i耳 于10000×gli心1分钟,加入biao譲i?amp;样品稀释液1.0mL至冻干biao譲i分校鬵uangai,静置10分钟,上下颠倒shuci,待其充分溶解hou,用移液器将其qingqinghunyun(浓du为20ng/mL)。然hou根ju需要进行倍比稀释(zhu:不要直接在反应孔中进行倍比稀释)。建议配制成以下浓du:an照稀释方法图例 biao譲i?amp;样品稀释液直接作为空白孔0ng/mL。如配制5ng/mLbiao譲i罚喝?.5mL10ng/mL的上述biao譲i芳尤牒?.5mLbiao譲i?amp;样品稀释液的EPguan中,hunyun即可,其yu浓du依ci类tui。 

4. 生物素化大发888zhenren平台工作液:实yan前jisuan当ci实yan所需用量(以100μL/孔ji),实际配制时应多配制100-200μL。使用前15分钟,以生物素化大发888zhenren平台稀释襤e∈团ㄋ跎锼鼗蠓?88zhenren平台(1:100)成工作浓du。当日使用。

5. 酶结he物工作液:实yan前jisuan当ci实yan所需用量(以100μL/孔ji),实际配制时应多配制100-200μL。使用前15分钟,以酶结he物稀释襤e∈团ㄋ鮄RP酶结he物(1:100)成工作浓du。

当日使用。

大鼠甲胎蛋白(αFP)酶lian**xi附检测试剂hebiao譲i废∈头椒ㄍ祭海ㄒ?00μL/guan为例,襜u筛鵭u实际用量来稀释,如200μL/guan)

1.使用前将所有的试剂和biao本缓慢均衡至室温(18-25oC),试剂不能直接在37oC溶解。

2.biao譲i饵span>(冻干品):每pingbiao譲i芳尤隻iao譲i废∈鸵裹span>1mL,gai好hou室温静置大约10分钟,tong时反复颠倒/cuo动以助溶解,其浓du为20ng/mL。准备7个稀释biao譲i返命span>EPguan,每个EPguan中加入500μL的biao譲i废∈鸵海缤妓鵶hi依ci倍比稀释,biao譲i废∈鸵裹span>(0pg/mL)直接作为空白孔。为保证实yan结果有效性,每ci实yan请使用新的biao譲i啡芤骸

      

1. 在各孔中加入biao譲i坊蜓犯?00μL, 37℃孵育90分钟

2. 加入100μL 生物素化大发888zhenren平台工作液,37℃孵育60分钟

3. 洗di3ci

4. 加入100μL酶结he物工作液, 37℃孵育30分钟

5. 洗di5ci

6. 加入90μL底物溶液, 37℃孵育15分钟左右

7. 加入50μL终zhi液,立即在450nmbo长chu测量ODzhi

8. 结果jisuan

一、操作yin素对ELISA结果的ying响ELISA操作bu骤复杂,操作不当将yin起较大的误cha。以下叙述各个bu骤中的ying响yin素。

1.加样

2.温育

3.洗di

4.xian色

5.比色

二、灰区的设置通常qing况下,ELISA定性实yan以“阳性”和“阴性”来bao告结果,两者间有一条分界线被称为“阳性pan断zhi”(cut-off value,COzhi),这是定性**测定结果bao告的依ju。

三、biao本复查ELISA蕑hiぜ觳夤谈丛樱瑈ing响yin素较多,即使室na质控在控,襜u赡躽in孔间cha异而造成结果的cha异,yinci加大复查力du是保证结果譲i沸缘mu煽糠椒ǎ热缍訦BsAg、HBeAg、HCV-Ab、HIV-Ab、TP-Ab等xiangmu祄u梢伞uo阳性biao本ji少见模shi的检测结果进行复查。

四、结果pan断和bao告常用下列几謟hi椒╞iaoshi结果:

1.定性测定

2.半定量测定 结果襤ua阋詃idubiaoshi。

3.定量测定 即用已知量的biao譲i纷饕幌盗邢∈蚳ou进行ELISA测定,绘制biao准曲线,结果以优良量或单位biaoshi。在ELISA定量检测中每一块反应bandubi须绘制xiang应的biao准曲线。

大鼠甲胎蛋白(αFP)酶lian**xi附检测试剂he会出蟴hi奈侍鈐i解决办法:

1. 加入反应终zhi液hou,mei有xi光zhi或xi光zhi偏低。

a.原yin:wei加入酶biao记物。

解决办法:请an照操作bu骤进行。

b.原yin:试剂hena容物wei能充分回。

解决办法:确定试剂hena容物回温houzai进行操作。

c.原yin:室温太低。

解决办法:若室温太低(<19℃),请于操作bu骤4,适当延长温育时间。

d.原yin:wei使用试剂he的清洗液清洗。

解决办法: 请用试剂hena所提供的清洗液清洗。

e.原yin:试剂he已过有效期限。

解决办法:请更换成仍在有效期限na的试剂he。

2. biao准曲线线性不jia,或是平行性不好。

a.原yin:温育位置bi光不簃ei蚴艿狡鞲扇拧

解决办法: 请确认温育位置ji不tou光也不tou风(如抽屉na)。

b.原yin:操作时间拖太jiu。

解决办法:请在方法熟练houzai进行操作。

c.原yin:微孔间xiang互污染。

解决办法: 加样品时,请小心勿溅出微孔外,以免造成其它微孔的污染。

d.原yin:biao譲i坊蛎竍iao记物所加入的量不一謑ong

解决办法:请使用已校正过的移液qiang,并确保其yuxi头之间有高du密he性。

e.原yin:添加样品或试剂的操作方法不正确。

解决办法:加样品或试剂时,xi头请勿接触微孔。

f.原yine碽an过程发生问题(如guan路堵塞、洗完banhouwei立刻进行下一bu骤)。

解决办法:请随时jian控洗ban机洗ban过程,洗完hou立即进行下一bu骤。

3. xi光zhi均偏高(或线性不够陡)。

a.原yin:室温太高(>25℃)。

解决办法: 若无法降低室na温du,请适当缩短bu骤4的温育时间。

b.原yin:底物溶液受到污染。

解决办法: 若发蟴hi孜锶芤阂裞heng蟴hi渡氩灰獄ai使用。

c.原yin:反应时间chao过太jiu。

解决办法:请控制反应时间。

d.原yin:酶biao记物污染了hena其它试剂。

解决办法:使用过的xi头应立即丢弃,可bi免试剂间xiang互污染,凡是试剂(特别蕅iao竍iao记物yu底物溶液)接触过的容器应立即清洗干净。(先以漂白水浸泡,zai以清水冲洗干净,可确保无can留)

4. 阴性biao譲i返膞i光zhi低于阳性biao譲i返膞i光zhi。

a.原yin:微孔中的试剂wei能充分hunhe。

解决办法: 试剂加完hou,需qingqiao盘四zhou使其充分hunhe均yun。

b.原yine碽an过程发生问题(tong2-f.)。

解决办法:请参考2-f.

c.原yin:添加样品或酶biao记物的量不一謑ong

解决办法: 请参考2-d.

zhu意事xiang:

A 仔细阅读说明书。

B 检查试剂hebiao签上的有效期。如果chao过有效期,请勿使用。

C an说明书确定所有试剂齐全(shu量、体ji)。

D biao本制备要规范,每份biao本体ji要an2-3个复孔以上的量制备(贮存),尽量分装做备份。短期na无法实yan者,zhu意低温保存。

E 准备好所有实yan额外所需物品,(比如移液器,试guan,清洗器,酶biao仪)。

F an说明书将所用试剂平衡至室温,根ju检测biao本shu量确定所需试剂的量。

G 检查试剂hena每种试剂的贮存条件,保证所有试剂均an照试剂hena说明书tui荐的条件存储。

H 检查不稳定或者变质的试剂溶液(比如沉淀或变色)。有xie试剂,比如biao譲i废∈鸵夯蛘呒觳庀∈鸵海赡茉谏鑚i时就含有沉淀物。所有试剂在di入酶biaoban之前,bi需充分hunyun。而you于沉淀物的特性,在加入酶biaoban之前,bi需不停搅ban。

I 保证充穤hi姆跤奔浜臀耫u。

J 莤ing鹗褂貌籺ong生产批号的试剂取代现有试剂或hunhe现有试剂。

K 在hunhe或溶解蛋白溶液时,bi免泡沫产生。

L 在实yankaishi之前,an排好实yan流程。

M 在实yankaishi之前,清洁工作台。

N 若觴ing侍猓u我公司或代理shang的技术支chilian系

大鼠甲胎蛋白(αFP)酶lian**xi附检测试剂he结果pan断:

1. 每个biao譲i返腛Dzhi减去空白孔的ODzhihou作图,如设置复孔,则应取其平均zhijisuan。以biao譲i返呐╠u为heng坐biao,OD謉i獄ong坐biao,绘出biao准曲线。亦可以OD謉i猦eng坐biao,biao譲i返呐╠u为zong坐biao,绘出biao准曲线。

2. tui荐使用专业的曲线制作软件,如curve expert 1.3或1.4,在软件界mianji可根ju样品ODzhi,youbiao准曲线查出xiang应的浓du,乘以稀释倍shu;亦可将样品的ODzhi代入biao准曲线的拟he方程shi,jisuan出样苀ang╠u,zai乘以稀释倍shu,糲i返氖导逝╠u。

3. 若样品ODzhi高于biao准曲线上限,应适当稀释hou重测,jisuan浓du时应乘以稀释倍shu。

 特异性:

本试剂he用于检测大鼠甲胎蛋白(αFP),经检测yu其它xiang似物质无明xian交cha反应。

you于受到技术ji样本来源的限制,不可能完成对所有xiang关或xiang似物謘hi籧ha反应检测,yinci本试剂he有可能yuwei经检测的其它物质有交cha反应。

回收率:

分别于定zhi血清ji血浆样本中加入一定量的大鼠甲胎蛋白(αFP)(加biao样品),重复测定并jisuan其均zhi,回收率为测定謉i肜砺踷hi的比率

线性:

在定zhi血清ji血浆样本na加入适量的大鼠甲胎蛋白(αFP),并倍比稀释成 1:21:41:81:16 的待测样本,线性范围糲i∈蚳ou样本中大鼠甲胎蛋白(αFP)含量的测定謉i肜砺踷hi的比率。


大鼠甲胎蛋白(αFP)酶lian**xi附检测试剂he精密du:

精密du用样品测定zhi的变异系shu CV biaoshi。CV(%) = SD/mean×100

批nacha:取tong批ci试剂he对低、中、高zhi定zhi样本进衳ie考觳狳/span>,每份样本连xu测定 20 ci,分别jisuan不tong浓du样本的平均zhiji SD zhi。

批间cha:选取 3 个不tong批ci的试剂he分别对低、中、高zhi定zhi样本进衳ie坎舛ǎ扛鲅臼褂胻ong一试剂he重复

测定 8 ci,分别jisuan不tong浓du样本的平均zhiji SD zhi。

批nacha: CV<10%

批间cha: CV<12%

稳定性:

经测定,试剂he在有效期naantui荐温du保存,其活性降低率小于 5%

为减小外buyin素对试剂he破坏前hou检测zhi的ying响,实yan室的环境条件需尽量保chi一致,尤其是实yan室na温du、湿duji温育条件。其ciyoutong一实yan员来进行操作可减少ren为误cha。


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